[发明专利]一种液体耐高温酸性甘露聚糖酶的制作方法

说明书

技术领域

本发明属于酶制剂领域，具体涉及一种液体耐高温酸性甘露聚糖酶的制作方法。

背景技术

甘露聚糖酶（endo-1,4-β-mannanase）是一种新型的酶制剂，属于一种半纤维素酶类，它除具有一般非淀粉多糖（NSP）酶类的作用——降解NSP，降低肠道粘度，促进营养物质的消化和吸收外；近来很多研究表明，甘露聚糖酶还是一种多功能的促生长剂，它可促进类胰岛素生长因子IGF-I的分泌，促进蛋白质的合成，提高瘦肉率；同时，它还可消除豆类中富含的β-甘露聚糖对葡萄糖吸收的干扰，极大提高饼粕尤其是豆粕的能量消化率。实际使用中还可看出，添加了甘露聚糖酶后动物的抵抗力及整齐度都有提高。实践证明，甘露聚糖酶已超脱了传统酶制剂的作用，成为一种新型的促生长饲料添加剂。

甘露聚糖酶可以分解玉米-豆粕型饲粮中的甘露聚糖为甘露寡糖。甘露寡糖作为一种生物化学益生素，可以改善肠道微生物组成，形成以双歧杆菌和乳酸菌为优势的肠道菌群。据报道，甘露寡糖可作为营养物质被双歧杆菌和乳酸杆菌选择性发酵利用，并促进其生长繁殖。但大肠杆菌、沙门氏菌等致病性菌却因无法利用而导致饥饿死亡。除此之外，甘露寡糖可与病原菌细胞壁上的受体结合，从而阻止细菌与动物肠黏膜上的糖基结合，保护肠黏膜结构和功能的完整，又由于甘露寡糖为非消化性物质，这种复合物就顺利通过胃肠道被排出体外，因而起到吸附肠道病原菌，对动物具有保健的作用。甘露寡糖不仅能连接到细菌上，而且能连接在毒素、病毒、真核生物上，结合后甘露寡糖可作为这些外源性抗原的助剂，缓解抗原的吸收，增强机体的细胞免疫和体液免疫。甘露寡糖不仅直接参与免疫调节而部分替代抗生素，在其与抗生素共用中，还能起到降低机体组织抗生素残留的作用。

在饲料加工过程和动物采食后，酶制剂一般要经受高温高湿制粒的破坏，胃酸和胃蛋白酶的损害，能够到达动物体内作用位点依然存留活性的那部分酶活称为有效酶活。这要求相应酶种具有良好耐热耐酸性能、抗胃蛋白酶、胰蛋白酶特性等等。良好的饲料酶有较宽的温度作用范围，保证既能在动物体温的温度下表现有较高的酶活，又能对饲料高温高湿制粒过程中表现出较好的耐受性；既能耐受胃酸的损害，在胃的酸性环境及小肠的中性环境下也能具有较高的酶活表现。

近年来，甘露聚糖酶一般由毕赤酵母流加甲醇液体发酵后，板框过滤或碟片离心生产出一些较低品质的甘露聚糖酶。虽然也有报道甘露聚糖酶由黑曲霉固体发酵的研究，但也未见其实际发酵生产及提取制造。本发明是由根霉固体发酵后，选用适合粗料分离的三足式离心机分离，生产出耐酸性耐高温的甘露聚糖酶。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种液体耐高温酸性甘露聚糖酶及其制作方法。

本发明液体耐高温酸性甘露聚糖酶的制作方法，其步骤包括：

浸泡：按根霉固体发酵曲料：水＝1：8-16的重量比例投料，将曲料投入水中浸泡，浸泡用水pH调至4.5，搅拌2-3小时，得混合液；

离心：将混合液置于离心机中在转速800-1200rpm的条件下离心10-15min；

过滤：取离心后的上清液置于过滤机中，加入占上清液重量7-10%的硅藻土，过滤获得滤清液；

超滤浓缩：膜分子量10000，浓缩至滤清液体积的1/8-1/12；

防腐稳定：在浓缩液中加入防腐剂和稳定剂，其加入的重量比例是，浓缩液：山梨醇：甘油：山梨酸钾＝85：10：5：0.1，搅匀。

以上所说的离心机采用三足式离心机；过滤机为板框过滤机。

由上述方法制作液体耐高温酸性甘露聚糖酶也在本发明的保护范围之内。

上述液体耐高温酸性甘露聚糖酶，其含甘露聚糖酶10000U／ml。

本发明的有益效果在于，和普通的由毕赤酵母流加甲醇液体发酵生产甘露聚糖酶等方法相比，无论是从耐酸性还是从耐热性方面来看，都明显的具有优势：

从耐酸性上看，本发明的甘露聚糖酶比AB MP1000耐酸性pH1.0，比和美酵素耐酸性pH3.5，比01毕赤酵母耐酸性pH2.5，比BSA细菌耐酸性pH1.5，比BSA米曲霉耐酸性pH1.0，比K毕赤酵母耐酸性pH2.5；

从耐热性上看，本甘露聚糖酶比AB MP1000耐高温3-5℃，比和美酵素耐高温约13℃，比01毕赤酵母耐高温约12℃，比BSA细菌耐高温30℃，比BSA米曲霉耐高温2℃，比K毕赤酵母耐高温约13℃。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不因此限制本发明。

实施例1