[发明专利]一种常温保存蛋白质组学用蛋白样品的方法

说明书

技术领域

本发明属于蛋白质组学领域，具体涉及一种常温保存蛋白质组学用蛋白样品的方法。

背景技术

Laemmli在1970年，首次根据分子量的大小使用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离T4噬菌体外壳蛋白(SDS-PAGE，Laemmli 1970年)。在Laemmli的基础上，O’Farrell发明了聚丙烯酰胺双向凝胶电泳(2-DE)技术(O’Farrell，1975)，这一技术已经广泛的应用到蛋白质组学研究中。在双向凝胶电泳技术中，样品制备是关键的一步。目前应用于植物蛋白的提取方法很多，最常用的有TCA/丙酮沉淀法(Giavalisco et al.，2003；Canovas et al.，2004)，酚抽法(Phe)(Hurkman and Tanak，1986)，随后这些方法被广泛的应用到蛋白质组学研究中，在这些方法的基础上，通过不断的改进和优化，wang等人发现了一种能很好的从植物组织中提取蛋白的BPP法(Wang et al.，2007)，目前这种方法已经被广泛的应用到蛋白质组学研究中(Wang et al.，2009；Wang et al.，2011)。

在蛋白质组学研究中，蛋白的质量直接影响到双向电泳的结果，蛋白易降解，一般把蛋白粉冻干和溶解在尿素和硫脲的裂解液中进行使用和保存(Gorg et al.，2004；Peltier et al.，2004；Valeria et al.，2005；Bao et al.，2006；Sun et al.，2007)，但是，这样的蛋白在低温下保存不了多久，更无法再常温下进行保存，并且不便于运输，这给研究者在蛋白保存和运输方面带来了很大的困难。

发明内容

本发明的目的在于提供一种常温保存蛋白质组学用蛋白样品的方法，该保存方法可以使蛋白样品在常温下保存长达半个月，在低温下如-20℃以下可以保存一年，甚至更久，经1-DE和2-DE的结果发现，按本发明方法保存的蛋白样品的质量很好，同时具有很好的质谱兼容性，并且运输方便。

本发明的上述目的是通过如下技术方案来实现的：一种常温保存蛋白质组学用蛋白样品的方法，将蛋白样品溶于Tris-饱和酚中，取酚相置于过饱和硫酸铵甲醇溶液中沉淀出蛋白，并将沉淀出来的蛋白于过饱和硫酸铵甲醇溶液中在常温下进行长期保存即可。

本发明所述的蛋白样品优选蛋白样品的粗提物或市售的蛋白样品的粉末，该蛋白样品的粗提物可以采用BPP法等常规方法从植物或动物样品中提取。

本发明所述Tris-饱和酚的pH值大于等于7.8。

本发明所述酚相与过饱和硫酸铵甲醇溶液的体积比优选为1∶1～10。

本发明将蛋白样品溶于Tris-饱和酚中，取酚相置于过饱和硫酸铵甲醇溶液中沉淀出蛋白，并将沉淀出来的蛋白于过饱和硫酸铵甲醇溶液中可以在常温下可以保存1～15天。

本发明将蛋白样品溶于Tris-饱和酚中，取酚相置于过饱和硫酸铵甲醇溶液中沉淀出蛋白，并将沉淀出来的蛋白于过饱和硫酸铵甲醇溶液中在-20℃以下进行保存1～3年。

本发明蛋白样品在饱和硫酸按溶液中可以常温保存半个月，在-20℃可以保存一年，甚至更久。为了检测蛋白的质量，对1-DE和2-DE图谱，发现按此方法保存的蛋白质量很好，能很好的用在蛋白质组学研究中，同时具有很好的质谱兼容性，不管是用飞机运输，还是火车运输蛋白样品，都不会影响蛋白的质量，这为蛋白的运输和保存带来了很大的方便。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

(1)使用本发明方法蛋白样品可以在常温保存长达半个月；

(2)使用本发明方法蛋白样品可以在-20℃保存一年以上；

(3)使用本发明方法保存的样品在常温下便于运输；

(4)使用本发明方法保存的蛋白样品质量很好，同时可以得到好的1-DE和2-DE结果；

(5)使用本发明方法保存的样品同时具备好的质谱兼容性；

(6)使用本发明方法在蛋白质组学的研究中发挥着重要作用，应用前景广阔。

附图说明

图1是实施例1中30℃放置不同时间段的1-DE蛋白图谱，其中：B0，B1，B3，B5，B10和B15分别是牛血清蛋白(BSA)样品在30℃分别放置0天，1天，3天，5天，10天和15天的1-DE；C0，C1，C3，C5，C10和C15分别是橡胶树C-乳清蛋白样品在30℃分别放置0天，1天，3天，5天，10天和15天的1-DE，M是蛋白Marker；