[发明专利]蛋白酶抑制剂BmSPI39及其制备方法和应用

权利要求书

1.蛋白酶抑制剂BmSPI39，由SEQ ID No.2中第25位至第98位氨基酸组成。

2.根据权利要求1所述的蛋白酶抑制剂BmSPI39，其特征在于，在N末端还有信号肽序列，所述信号肽序列由SEQ ID No.2中第1位至第24位氨基酸组成。

3.编码权利要求1所述蛋白酶抑制剂BmSPI39的基因。

4.根据权利要求3所述的基因，其特征在于，由SEQ ID No.1中第96位至第320位核苷酸组成。

5.根据权利要求4所述的基因，其特征在于，在5’末端还有信号肽编码序列，由SEQ ID No.1中第24位至第95位核苷酸组成。

6.根据权利要求5所述的基因，其特征在于，其cDNA全长序列由SEQ ID No.1中第1位至第440位核苷酸组成。

7.含有权利要求3至6任一项所述基因的重组表达载体。

8.根据权利要求7所述的重组表达载体，其特征在于，以p28质粒作为基础载体，所述p28质粒由pET28a质粒删减部分多克隆位点后获得，删减后的多克隆位点序列如SEQ ID No.10所示。

9.含有权利要求7或8所述重组表达载体的工程菌。

10.根据权利要求9所述的工程菌，其特征在于，以大肠杆菌BL21(DE3)菌株为宿主菌。

11.权利要求1所述蛋白酶抑制剂BmSPI39的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将由SEQ ID No.1中第96位至第320位核苷酸组成的基因克隆入p28质粒的多克隆位点，获得重组表达载体BmSPI39-p28，再将重组表达载体BmSPI39-p28转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株，获得工程菌BmSPI39-p28-BL21(DE3)，再用终浓度为0.2mM的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷于37℃诱导表达5小时，收集诱导表达后的菌体，超声破碎，离心，收集上清，用Ni²⁺-NTA 亲和层析纯化，即制得蛋白酶抑制剂BmSPI39；所述p28质粒由pET28a质粒删减部分多克隆位点后获得，删减后的多克隆位点序列如SEQ ID No.10所示。

12.权利要求1所述的蛋白酶抑制剂BmSPI39和权利要求3所述的基因在制备枯草杆菌蛋白酶类蛋白酶抑制剂中的应用。

13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述枯草杆菌蛋白酶类蛋白酶为枯草杆菌蛋白酶、蛋白酶K、球孢白僵菌体壁降解蛋白酶CDEP-1和蜂蜜曲霉蛋白酶。

14.权利要求1所述的蛋白酶抑制剂BmSPI39和权利要求3所述的基因在制备球孢白僵菌体壁降解蛋白酶CDEP-1诱导的杀虫性黑化反应阻断剂中的应用。

15.根据权利要求14所述的应用，其特征在于，所述CDEP-1诱导的杀虫性黑化反应为CDEP-1诱导的家蚕黑化反应。

16.权利要求3所述的基因在培育具有致病真菌抗性的家蚕品系中的应用。