[发明专利]检测亲内脏利什曼原虫感染和诊断黑热病的免疫层析试条

权利要求书

1.一种检测亲内脏利什曼原虫感染和诊断黑热病的免疫层析试条，包括一个样品垫、一个紧密连接于所述样品垫的含有胶体金标记探针的金标垫、一个与所述金标垫紧密连接的纤维素膜和一个紧密连接于所述纤维素膜的吸水垫，所述的吸水垫远离所述的金标垫，在所述纤维素膜上、靠近吸水垫的一端设置有质控线，在质控线和金标垫之间的纤维素膜上设置一条检测线，其特征在于：所述的检测线含有亲内脏利什曼原虫的虫体可溶性抗原，所述的质控线含有特异性结合胶体金标记探针的抗体。

2.如权利要求1所述的检测亲内脏利什曼原虫感染和诊断黑热病的免疫层析试条，其特征在于：所述的亲内脏利什曼原虫的虫体可溶性抗原来源于亲内脏利什曼原虫的前鞭毛体或无鞭毛体。

3.如权利要求1所述的检测亲内脏利什曼原虫感染和诊断黑热病的免疫层析试条，其特征在于：所述的胶体金标记探针为金黄色葡萄球菌A蛋白、或链球菌G蛋白、或鼠抗人IgG的单抗、或鼠抗人IgG的单抗多抗、或者兔抗人IgG抗体，所述质控线为抗金黄色葡萄球菌A蛋白抗体、或抗链球菌G蛋白抗体、或抗鼠抗人IgG的单抗、或鼠抗抗人IgG的单抗多抗的抗体、或者抗兔抗人IgG抗体的抗体。

4.如权利要求1所述的检测亲内脏利什曼原虫感染和诊断黑热病的免疫层析试条，其特征在于：所述的亲内脏利什曼原虫虫体可溶性抗原的蛋白浓度为1-20mg/mL，喷涂量为100μL/cm²，胶体金标记探针的浓度以蛋白浓度计为 1-5mg/ 15-20mL。

5.如权利要求3所述的检测亲内脏利什曼原虫感染和诊断黑热病的免疫层析试条，其特征在于：抗金黄色葡萄球菌A蛋白抗体、或抗链球菌G蛋白抗体、或鼠抗人IgG的单抗、或鼠抗人IgG的单抗多抗、或者兔抗人IgG抗体溶液的浓度为0.1-5mg/mL，喷涂量为100μL/cm²。

6.如权利要求1所述的检测亲内脏利什曼原虫感染和诊断黑热病的免疫层析试条，其特征在于：所述免疫层析试条背面设置有一个背板。

7.一种试剂盒，包括一个盒体，其特征在于：所述的盒体中设置有权利要求1所述的免疫层析试条，所述的盒体的一个侧面上设置有一个检测孔和一个观测窗，所述的检测孔位于样品端吸水垫的上方，所述的观测窗位于所述的检测线和质控线的上方。

8.一种制备权利要求1所述的检测亲内脏利什曼原虫感染和诊断黑热病的免疫层析试条的方法，其特征在于：包括以下步骤：一个制备亲内脏利什曼原虫虫体可溶性抗原的步骤，将来源于亲内脏利什曼原虫虫体的抗原液蛋白浓度调整到1-20mg/mL；一个制备胶体金标记探针的步骤，一个制备与胶体金标记探针特异结合的抗体的步骤，所述的与胶体金标记探针特异结合的抗体的溶液浓度为0.1-5mg/mL；一个将亲内脏利什曼原虫虫体可溶性抗原溶液喷涂到纤维素膜上形成检测线的步骤；一个将能与胶体金标记探针特异结合的抗体溶液喷涂到所述的纤维素膜上质控线的步骤，所述的质控线和所述的检测线相邻设置；一个将玻璃纤维膜或聚脂膜浸入胶体金标记探针溶液中制备金标垫的步骤；将一个吸水垫粘贴在所述纤维素膜的一侧，所述的吸水垫靠近质控线、远离检测线，将所述的金标垫粘贴在纤维素膜的另外一侧，所述的金标垫靠近检测线，将一个样品垫粘贴金标垫的远离所述纤维素膜的一侧。

9.如权利要求8所述的检测亲内脏利什曼原虫感染和诊断黑热病的免疫层析试条的制备方法，其特征在于：所述的亲内脏利什曼原虫虫体可溶性抗原的制备方法是将亲内脏利什曼原虫前鞭毛体或无鞭毛体接种于培养基中培养，在原虫处于对数生长期，原虫密度为10⁵-10⁷/mL时，2-6℃下离心收集前鞭毛体或无鞭毛体，弃上清，沉淀同法用PBS洗1-5次后，按前鞭毛体或无鞭毛体的压积量加3-5倍体积的PBS，在液氮和35-40℃水浴中，反复冻融3-7次，然后在冰浴中超声粉碎1-5次，2-6℃下离心，上清即为可溶性抗原。

10.如权利要求8所述的检测亲内脏利什曼原虫感染和诊断黑热病的免疫层析试条的制备方法，其特征在于：在一个制备胶体金标记探针的步骤中，将1-5mg金黄色葡萄球菌A蛋白、或链球菌G蛋白、或鼠抗人IgG的单抗、或鼠抗人IgG的单抗多抗、或者兔抗人IgG抗体加入100mL胶体金溶液，离心取沉淀，复溶到15-20mL，加入蔗糖使蔗糖的终浓度为2%-10%。

11.一种亲内脏利什曼原虫虫体可溶性抗原的制备方法，其特征在于：将亲内脏利什曼原虫前鞭毛体或无鞭毛体接种于培养基中培养，在原虫处于对数生长期，原虫密度为10⁵-10⁷/mL时，2-6℃下离心收集前鞭毛体或无鞭毛体，弃上清，沉淀同法用PBS洗1-5次后，按前鞭毛体或无鞭毛体的压积量加3-5倍体积的PBS，在液氮和35-40℃水浴中，反复冻融3-7次，然后在冰浴中超声粉碎1-5次，2-6℃下离心，上清即为可溶性抗原。