[发明专利]一种K562细胞扩增激活NK细胞的方法

权利要求书

1.一种K562细胞扩增激活NK细胞的方法，其特征在于包括下述步骤：

(1)以K562细胞系转录稳定表达CD8α-白介素21、CD14、CD19、CD86和CD137的表达载体，CD8α为在细胞膜上表达的膜蛋白，CD8α基因连接白介素21基因后使得白介素21表达在细胞膜上，成为跨膜蛋白；而CD14、CD19、CD86和CD137为膜蛋白，载体中含有病毒启动子和选择标记基因；

(2)当外源表达载体进入宿主细胞后，激活启动子，培养K562细胞一段时间，即可以得到在细胞膜上的白介素21、CD14、CD19、CD86和CD137多肽；

(3)经培养后的K562细胞膜上具有表达跨膜白介素21、CD14、CD19、CD86和CD137的细胞，通过强酸，强碱、和/或辐照、及通过高速离心收集K562细胞；或对K562细胞的依次用硫酸铵或乙醇沉淀，强酸提取，阴离子或阳离子交换色谱，疏水作用层析，亲和层析，羟基磷灰石色谱法，色谱法和凝集素进行纯化收集；

(4)将上述离心收集的K562细胞与NK细胞、或NK细胞和外周血单核细胞的组合、或是NK细胞与淋巴细胞的组合、或是外周血单核细胞和其它淋巴细胞的组合、或是白介素2和/或白介素21和/或CD14和/或CD19和/或CD86和/或CD137与白细胞的组合进行共同培养、或在纯化分离K562细胞后与PBMC共同培养，激活扩增NK细胞，直至NK细胞代表总数的50％以上。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(4)中的培养液为：Eagle′s培养液加入10％人血清或10％小牛血清，或RPMI 1640加入10％人血清或10％小牛血清，或F-10(Ham′s)Nutrient mixtures加入10％人血清或10％小牛血清。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于跨膜白介素21、CD14、CD19、CD86和CD137的剂量在50pM～1nM。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的跨膜白介素21、CD14、CD19、CD86和CD137的剂量在500pM～800pM。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的跨膜白介素21、CD14、CD19、CD86和CD137是经过纯化处理的蛋白质，纯化的淋巴细胞至少代表总数的50％。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的跨膜白介素21、CD14、CD19、CD86和CD137组成的淋巴细胞在K562细胞中的表达剂量比例是，K562细胞∶淋巴细胞＝1～10∶1。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述的淋巴细胞中加入跨膜白介素21-CD137复合物，且K562细胞∶淋巴细胞＝1∶1、2∶1、3∶1、或4∶1。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的跨膜白介素21、CD14、CD19、CD86和CD137扩增的NK细胞过程是通过溶于生理盐水溶液的方法进行。