[发明专利]一种从动物粪便中提取高分子量基因组的方法

权利要求书

1.一种从动物粪便中提取高分子量基因组的方法，其特征在于按以下步骤进行：

（1）样品处理：用无菌PBS缓冲液溶解收集的动物粪便样品，彻底混匀后先低速离心去除大的食物残渣，然后依次用孔径为100μm、70μm、40μm的灭菌细胞过滤器进行过滤，并用PBS缓冲液对截留在滤网上的杂质进行多次冲洗；滤液置于离心机中离心，收集菌体；菌体依次用PBS缓冲液和TE缓冲液洗涤、离心收集菌体，用TE缓冲液悬浮菌体；

（2）菌体细胞裂解：                                               向菌体悬浮液中加入高浓度的溶菌酶至终浓度15mg/ml，轻柔混匀后37℃水浴1h；加入消色肽酶至终浓度3mg/ml，轻柔混匀后37℃水浴30min；加入蛋白酶K至终浓度2mg/ml，轻柔混匀后55℃水浴5min；加入浓度为10%的SDS，轻柔混匀后55℃水浴1h；

（3）抽提DNA：在上述处理后的细胞裂解液中加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混合液，轻柔混匀后离心收集上清液；加入等体积的氯仿/异戊醇混合液，轻柔混匀后离心收集上清液；加入1倍体积异丙醇、1/10体积醋酸钠，轻柔混匀后室温沉淀30min以上；离心收集沉淀，用浓度为70%的乙醇洗涤沉淀，离心后收集沉淀；沉淀置于室温或真空干燥后，用TE或无菌去离子水溶解，并用RNA酶37℃水浴30min消解去除RNA，即为基因组DNA提取液。

2.根据权利要求1所述的从动物粪便中提取高分子量基因组的方法，其特征在于所述PBS缓冲液为：137 mmol/L NaCl，2.7 mmol/L KCl，10 mmol/L Na₂HPO₄，2 mmol/L KH₂PO4，pH 7.4。

3.根据权利要求1所述的从动物粪便中提取高分子量基因组的方法，其特征在于所述TE缓冲液为：10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)，1 mmol/L  EDTA(pH 8.0)。

4.根据权利要求1所述的从动物粪便中提取高分子量基因组的方法，其特征在于所述酚/氯仿/异戊醇混合液的体积比为25:24:1。

5.根据权利要求1所述的从动物粪便中提取高分子量基因组的方法，其特征在于所述氯仿/异戊醇混合液的体积比为24:1。