[发明专利]一种奶制品中三聚氰胺的快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及三聚氰胺的检测方法。

背景技术

三聚氰胺，由于其本身含氮量高达66%，经常被非法商利用掺杂在牛奶或者动物饲料中以达到提高蛋白含量的目的。这种在牛奶或动物饲料中非法添加的三聚氰胺已经导致了婴儿的肾结石甚至是死亡事件，因而最近人们很关注三聚氰胺的检测。

目前检测三聚氰胺的方法主要有高效液相法（HPLC）、高效液相与质谱联用（HPLC-MS）等方法，然而这些方法涉及到大型仪器，不利于快速的实时分析检测。针对目前现有的检测方法的现状发展一种新的操作简单、灵敏、快速检测三聚氰胺的方法是很有意义的。

发明内容

本发明的目的就是针对现有技术存在的不足，基于三聚氰胺和胸腺嘧啶（T碱基）分子间三个氢键的原理，在水溶液的缓冲体系下，利用polyT₅₅缠绕的金纳米颗粒，建立了一种快速、灵敏地检测奶制品中三聚氰胺的方法，该方法具有较高选择性和灵敏度，免修饰，操作简单，不需要大型仪器；同时，该方法还拓展了三聚氰胺—胸腺嘧啶模式的三个氢键结构在水相分析检测的体系中的应用。

通常三聚氰胺—胸腺嘧啶模式的三个氢键结构只有在固相表面，气象液相界面，有机相中或者超真空条件才能形成。本申请人设计了在水溶液条件下，基于三聚氰胺和胸腺嘧啶分子间三个氢键的原理建立一种简单快速的检测三聚氰胺的方法。

目前，这种三个氢键的结构应用在水相中的分析检测体系里的报道很少。申请人发现，四种DNA的碱基里，只有T碱基可以与三聚氰胺形成这种类似的三个氢键的结构，因此申请人以金纳米颗粒为材料，发明了这种具有很高的特异性、高灵敏且可视化检测奶制品中三聚氰胺的方法。

本发明方法步骤如下：

1.操作步骤

（1.1）处理牛奶样品：将牛奶样品先用纯净水溶解至总体为50 mL，之后再稀释10倍后用超滤膜超滤，20000 rpm离心30 min后，取上层清夜稀释10000倍；

（1.2）DNA polyT₅₅与金纳米颗粒AuNPs的孵育：在离心管中加入摩尔比为1:23的金纳米颗粒AuNPs和DNA polyT_55，，涡混合均匀，室温反应5 -10 min；

（1.3）然后再依次加入需要检测的奶制品和相当于溶液混合物总体积1/5的pH 7.6 NaH₂PO₄-Na₂HPO₄缓冲溶液，旋涡混合均匀后5-10 min；

（1.4） 采用PRLS测定，在测定散射光谱时，设置激发波长和发射波长相等，即                                               _em = _ex。

2.结果分析：

（2.1）光谱特征：若在520 nm 处有等离子共振吸收峰，在550 nm处的散射强度逐渐增强，在620nm处的吸收也呈现线性增强的趋势，则表明奶制品中含有三聚氰胺；

（2.2）形态变化：若观察到金纳米颗粒溶液变成红色，或成红色过渡到紫色最后变为蓝色，也表明奶制品中含有三聚氰胺。

本发明的原理如示意图1所示，polyT₅₅缠绕在金纳米颗粒AuNPs表面，金纳米颗粒处于分散状态；当加入三聚氰胺后，由于三聚氰胺和胸腺嘧啶分子间三个氢键的作用，金纳米颗粒发生聚集。利用金纳米颗粒的聚集分散状态达到检测三聚氰胺的目的。

为评估该方法用于实际测定的选择性，针对牛奶中常见的无机离子及一些共存物的干扰进行了考察，只有蛋白质对该检测有一定的干扰。由于蛋白会吸附在金纳米颗粒表面起保护作用使得金纳米颗粒聚集程度变弱。因而我们在牛奶样品检测时，先用超滤的方式出去分子量较大的蛋白防止其对金纳米颗粒的聚集产生影响。