[发明专利]抗草鱼呼肠孤病毒VP5蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学领域，具体涉及一种抗草鱼呼肠孤病毒VP5蛋白的单克隆抗体，杂交瘤细胞株及其建立一种检测草鱼呼肠孤病毒的夹心ELISA方法。

背景技术

草鱼出血病是一种高度传染性、致死性的病毒性鱼病，流行于我国各地养殖区，尤以长江流域和广东、广西、福建最为普遍，死亡率高达80%，严重影响我国草鱼养殖业的发展。其病原为草鱼呼肠孤病毒（Grass carp reovirus，GCRV），是我国分离、鉴定的第一株水生动物病毒（陈燕新，江育林。科学通报，1983，28:1138-1140）。1979年Meyers TR等报道从水生动物中分离出第一株呼肠孤样病毒（Meyers T R. J Gen Virol, 1979, 43: 203~212）。 目前国际上已分离鉴定40余种水生呼肠孤病毒(aquareovirus)。然而在这些分离鉴定出来的毒株中，大多数毒株不能引起宿主的病理反应或仅表现出较弱的致病性。GCRV为水生呼肠孤病毒中致病力最强的毒株。

草鱼呼肠孤病毒的基因组由11个dsRNA片段组成，不同的毒株间病毒基因组的总分子量差异不大(约15×10⁶Da), 而各片段分子量有所差异, 按分子量大小, 11个片段可分为3 组, 即较大片段( L1、L2、L3 )、中等片段(M4、M 5、M6) 和较小片段( S7、S8、S9、S10、S11)（田静等，中国病毒学，1999,4(1):87-92；方敏,黄华梁.生物工程学报，2001,17(6):608-612）。成熟的GCRV颗粒由7种结构蛋白和4种非结构蛋白组成，其中病毒蛋白VP5和VP7构成了病毒的外层衣壳组分。通过蛋白酶裂解实验揭示了VP5和VP7在病毒感染及致病中起着不可替代的作用。

我国是个鲤科鱼类养殖的大国。在出口某些国家时，进出口的检验检疫单位对草鱼呼肠孤病毒是必须检测的。该病的确诊目前只能尝试用细胞分离病毒后用PCR或者直接电泳等方法来完成。主要是由于没有好的抗原和抗血清，免疫学检测方法还不是很成熟。我国的进出口检验检疫获得好的抗血清或者检测方法是迫切需要。获得具有特异性较强的抗草鱼呼肠孤病毒的单克隆抗体，不仅具有快速、灵敏的特点，而且还适用大规模的检测。单克隆抗体技术在国内外已经是一种非常成熟的技术，然而尚未见具有特异性较强的抗草鱼弧肠弧病毒的单克隆抗体的相关报道。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是提供一种抗草鱼呼肠孤病毒VP5蛋白的单克隆抗体。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种检测草鱼呼肠孤病毒的ELISA试剂盒。

本发明所要解决的第三个技术问题是提供了一种体外检测草鱼呼肠孤病毒的方法。

本发明所要解决的第四个技术问题是提供了一种抗草鱼呼肠孤病毒VP5蛋白的单克隆抗体在检测草鱼呼肠孤病毒中的应用。

一种病毒含有多种抗原，一种抗原又可能含有多个抗原位点。因此针对一种抗原可以获得不止一种抗体，但是这些抗体对抗原的结合特性可能是不同的。为了找到能与抗原特异性结合的单克隆抗体，需要进行大量反复比较、筛选和鉴定工作。本发明通过大量的工作，获得了能分泌特异性结合草鱼弧长病毒VP5蛋白的杂交瘤细胞株；并在此的基础上首次建立了检测草鱼呼肠孤病毒的夹心ELISA检测方法，并制备了检测草鱼呼肠孤病毒的ELISA试剂盒，可用于大规模草鱼呼肠孤病毒的检测，具有很广阔的应用前景。

为解决上述技术问题，本发明所提供的技术方案如下：

本发明所提供的抗草鱼呼肠孤病毒VP5蛋白的单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No.5796的小鼠杂交瘤细胞株分泌产生。该小鼠杂交瘤细胞株已于2012年2月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址是中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号），保藏编号为其保藏编号为CGMCC No.5796。

保藏编号为CGMCC No.5796的小鼠杂交瘤细胞株也属于本发明的保护范围。