[发明专利]非天然活性氨基酸遗传密码增加

权利要求书

1.一种在真核细胞中生产至少一种含有至少一个非天然氨基酸的蛋白质的方法，该方法包括：

在合适的培养基中培养含有核酸的真核细胞，该核酸包含至少一个选择密码子并编码所述蛋白；其中所述培养基含有非天然氨基酸，所述真核细胞包含在细胞中起作用并识别选择密码子的正交tRNA(O-tRNA)和优选地氨酰化具有非天然氨基酸的O-tRNA的正交氨酰基tRNA合成酶(O-RS)；

在该真核细胞中将非天然氨基酸掺入所述蛋白质，其中该非天然氨基酸包含第一活性基团；和

将该蛋白质与包含第二活性基团的分子接触；其中第一活性基团与第二活性基团反应，使该分子通过[3+2]环加成附着到所述非天然氨基酸上。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分子是染料、聚合物、聚乙二醇衍生物、光交联剂、细胞毒化合物、亲和标记、生物素衍生物、树脂、第二种蛋白质或多肽、金属螯合剂、辅因子、脂肪酸、碳水化合物或多核苷酸。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一活性基团是炔基或叠氮基部分，所述第二活性基团是叠氮基或炔基部分。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述第一活性基团是炔基部分，所述第二活性基团是叠氮基部分。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述非天然氨基酸包括对-炔丙基氧基苯丙氨酸。

6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述第一活性基团是叠氮基部分，所述第二活性基团是炔基部分。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述非天然氨基酸包括对-叠氮基-L-苯丙氨酸。

8.一种由权利要求1所述方法生产的蛋白质。

9.如权利要求8所述的蛋白质，其特征在于，所述蛋白质由至少一种体内翻译后修饰进行修饰，其中所述翻译后修饰选自：N-糖基化、O-糖基化、乙酰化、酰化、脂质-修饰、棕榈酰化、棕榈酸酯加成、磷酸化和糖脂-连接修饰。