[发明专利]一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗稀释液

说明书

技术领域

本发明涉及一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗稀释液，尤其是一种含有适量灭活草分枝杆菌菌体的高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗稀释液。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)又称“猪蓝耳病”，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)引起的猪的一种高度接触性传染病，不同年龄、品种和性别的猪均能感染，但以妊娠母猪和1月龄以内的仔猪最易感；该病以母猪流产、死胎、木乃伊胎、弱仔以及仔猪咳嗽、气喘等呼吸症状为主要特征。该病从20世纪80年代后期出现以来，已给全球的养猪业造成严重的经济损失。(吴佳俊等，猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗研究进展，中国预防兽医学报，2010，32(8)：655-658)。

2006年4月，我国南方地区暴发了一种以持续高热、食欲废绝、身体发绀、蓝耳、腹泻为特征，高发病率和高死亡率，传播迅速的高致病性蓝耳病(Highly pathogenic PRRS，HP-PRRS)，波及全国25个省份，经济损失巨大，研究证明引发该病的主要病原是高致病性PRRSV，鉴于该病的严重危害性，我国于2008年底在新修订的《一、二、三类动物疫病病种名录》中将其列为一类动物疫病(韦天超，2009)。高致病性猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)又名蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株(PRRSV)引起猪的一种急性、热性、接触性传染病。以繁殖障碍、呼吸困难、耳朵蓝紫、并发其他传染病为主要特征。(马红艳，郝永清，猪繁殖与呼吸综合征的研究.畜牧与饲料科学，2007，28(4)：43-45.)。

为了有效地控制高致病性猪繁殖与呼吸综合征，国内已开发用于预防PRRS的疫苗。在PRRS活疫苗研制中，疫苗毒株、病毒培养条件和免疫增强剂是研发有效疫苗的关键。其中，添加免疫增强剂是提高疫苗效力的有效途径。

草分枝杆菌是分枝杆菌中的一种，其中分枝杆菌胞壁酰二肽(MDP)具有很强的免疫治疗作用，草分枝杆菌多糖MPS在免疫调节、抑制病毒复制方面有很好效果(周莉婷，赵晶晶等，分枝杆菌多糖免疫调节剂研究进展，药物生物技术，2011，18(2)：176-179)。草分枝杆菌可用于高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗稀释液中，通过提高宿主自身的免疫应答能力来提增强疫苗免疫力，安全可靠。由于草分枝杆菌发酵方便、成本低廉，便于临床大面积推广使用。

由于稀释液需要与高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗混合使用，普通的甲醛灭活剂在草分枝杆菌菌体中有残留的风险，能对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒产生影响，我们考虑使用β-丙内酯对草分枝杆菌菌体进行灭活。由于β-丙内酯水溶液半衰期短(10℃时仅为18hr，25℃时为3.5hr，50℃时为20min，75℃时为5min)，能在疫苗液体中完全水解，不必考虑在成品疫苗中的残留，灭活的草分枝杆菌菌体中无灭活剂残留，能够有效保护高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗的免疫原性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗稀释液，从而将高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗的免疫水平提高到一个新的高度，更加有效的预防免疫猪群高致病性猪繁殖与呼吸综合征的发生。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：

利用一株购于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国普通微生物保藏管理中心、编号为CGMCC AS 4.1180的草分枝杆菌(Mycobacterium phlei)编号：CGMCC AS 4.1180菌株，进行草分枝杆菌菌体的制备，然后将草分枝杆菌菌体按照每毫升中含0.001～0.1mg菌体(优选0.08mg)的量添加到高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗稀释液中，得到一种新型疫苗稀释液。

具体实施方式

1.草分枝杆菌菌株来源

本发明涉及到的草分枝杆菌(Mycobacterium phlei)菌株购于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国普通微生物保藏管理中心，编号：CGMCC AS 4.1180。

2.草分枝杆菌菌体的制备

(1)种子培养

将草分枝杆菌(Mycobacterium phlei)CGMCC AS 4.1180株置于种子罐中进行培养，37℃通气培养，pH值为7.0，培养时间为3～4天，得到发酵用种子液；