[发明专利]一种载GDNF微泡制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种载GDNF微泡，由内部包裹生物惰性气体的脂质双分子层和连接于所述脂质双分子层外侧的生物素化的GDNF组成。

2.根据权利要求1所述的载GDNF微泡，其特征在于：所述脂质双分子层由下述质量份的物质组成：二硬脂酰磷脂酸胆碱4.9-5.1份、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 0.9-1.2份、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素0.9-1.2份；所述脂质双分子层与生物素化的GDNF通过生物素-抗生物素蛋白-生物素连接。

3.根据权利要求1或2所述的载GDNF微泡，其特征在于：所述载GDNF微泡的平均粒径为2-3μm。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的载GDNF微泡，其特征在于：所述生物惰性气体为六氟化硫或者全氟丙烷。

5.制备权利要求2-4中任一项所述载GDNF微泡的方法，包括下述步骤：

1)将二硬脂酰磷脂酸胆碱4.9-5.1份、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇20000.9-1.2份、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素0.9-1.2份溶解于三氯甲烷中混匀，在干燥的N₂流作用下除去三氯甲烷，使磷脂在容器壁上形成一层均匀的薄膜，真空干燥2小时以上；

2)在含有干燥磷脂薄膜的容器中加入脱气的pH值为7.4的Tris缓冲溶液，得到磷脂溶液，其中，所述Tris缓冲溶液中含体积分数为10％的甘油和体积分数为10％的丙二醇；

3)加热所述磷脂溶液到其相转变温度以上，并用水浴超声使磷脂溶液彻底分散直至透明，然后分装入西林瓶中，并将瓶中的空气置换成生物惰性气体，震荡，得到微泡；

4)离心漂浮法清洗微泡3-4次，除去未形成微泡的磷脂；在清洗后的微泡中加入抗生物素蛋白，室温下孵育20分钟，用PBS溶液离心漂浮法清洗3-4次，除去未耦合的抗生物素蛋白；然后在耦合抗生物素蛋白的微泡中加入生物素化的GDNF，室温下孵育15分钟，之后用漂浮法清洗3-4次除去未结合的生物素化GDNF，得到载GDNF微泡。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中所述磷脂溶液的浓度为2.8-3.1mg/ml。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：步骤4)中所述微泡、抗生物素蛋白、生物素化的GDNF的配比为(0.85-1.1)ml∶(0.08-0.12)mg∶(0.9-1.2)mg。

8.一种载GDNF微泡的给药套装，包括权利要求1-4中任一项所述的载GDNF微泡和聚焦超声设备；所述载GDNF微泡的给药量设定为0.5ml，所述聚焦超声设备的参数设置如下：探头频率1MHz，超声照射时间60s，声压0.8MPa，延迟时间60s。