[发明专利]一种海藻附生真菌氯代缩酚酸环醚类化合物及其制备和应用

权利要求书

1.一种海藻附生真菌氯代缩酚酸环醚类化合物的制备方法，其特征在于包括如下操作步骤：

I.发酵

将爪曲霉(Aspergillus unguis)CGMCC No.3372接种于真菌液体培养基中静止发酵，过滤，分别收集菌丝体和发酵液；

其中，所述真菌液体培养基组成，每升中含：土豆汁500mL，天然粗海盐配制的40g/L盐水500mL，蔗糖20g；

II.粗提

将步骤I获得的发酵液经乙酸乙酯萃取并浓缩，将步骤I获得的菌丝体用有机溶剂提取并浓缩，将所得浓缩物合并，即为粗提物；

其中，所述有机溶剂为氯仿、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中一种或几种；

III.分离纯化

将步骤II获得的粗提物经硅胶柱层析、反相柱层析、凝胶柱层析或高压液相色谱分离得到氯代缩酚酸环醚类化合物(I)。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤III所述的分离纯化条件为：

a.将步骤II获得的粗提物经硅胶柱层析，用石油醚-二氯甲烷或石油醚-氯仿进行梯度洗脱，收集以洗脱液体积比1∶2～3梯度的洗脱的组分；

b.将步骤a收集的洗脱组分再进行硅胶柱层析，洗脱液为体积比40～30∶1的石油醚-乙酸乙酯；

c.将步骤b收集的洗脱组分进行反相柱层析，洗脱液为体积百分含量为90％的甲醇水溶液；

d.将步骤c收集的洗脱组分进行凝胶柱层析，洗脱液为甲醇；收集符合下述特征的组分，即权利要求1所述的海藻附生真菌氯代缩酚酸环醚类化合物(I)：

TLC检测收集在254nm紫外线照射下呈单个、均匀的深紫色斑点，茴香醛硫酸不显色的组分；

在检测用的薄层层析条件下Rf值为0.25的组分；所述的检测用薄层层析板为GF254硅胶板，展开剂为体积比为3∶1的石油醚-乙酸乙酯，添加0.1％体积的乙酸；

在检测用的高效液相分析条件下保留时间为22.5min的单一色谱峰的组分；所述的检测用高效液相色谱分析条件为Hypersil C-18柱，填料粒径5微米，柱尺寸4.6mm×250mm，流动相为体积百分含量为55％的甲醇水溶液，添加万分之一体积的改性剂乙酸，流速1ml/min。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤a或b中所述的硅胶柱层析，所用硅胶为200～300目。

4.根据权利要求1、2或3中任一项所述的制备方法，其特征在于：步骤I中静止发酵的条件是：28℃培养箱静止发酵20天之后，加入发酵液一半体积的乙酸乙酯杀灭真菌。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤II中的发酵液用乙酸乙酯萃取三次，减压浓缩；菌丝体粉碎后用甲醇提取三次，减压浓缩。

6.利用权利要求1所述的制备方法获得的该氯代缩酚酸环醚类化合物，在常温常压下为无色针晶。

7.根据权利要求6所述的该氯代缩酚酸环醚类化合物在制备抗细菌剂、抗肿瘤药物及农用杀虫剂中的应用。