[发明专利]灵芝多糖F31的制备方法及其降血糖功能

说明书

技术领域：

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种具有降血糖作用的灵芝多糖F31及其制备方法和用途。

背景技术：

糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢紊乱综合症，全世界糖尿病患者以每年6％的速度增加。预计在2010年至2030年间，发展中国家的成年人总患病者会增加69％，发达国家会增加20％。糖尿病分为1型和2型糖尿病，其中2型糖尿病占整个总数的90％以上。目前的医学尚不能攻克糖尿病，糖尿病的治疗主要以长期服用药物控制和缓解病情，然而目前临床使用药物多为化学药物或生化药物，毒副作用的长期积累对人体的影响很大。这一严峻形势促使对糖尿病药物的新药开发重点转向从自然界中寻找天然、安全、疗效确切的新型活性成分。

作为我国民间传统中药的灵芝(Ganoderma lucidum)，其多糖成分在抗病毒、抗肿瘤、免疫力提高、降血压、降血糖等方面都表现出显著的作用。国内外学者均报道过灵芝多糖在动物模型上表现出良好的降血糖作用，例如日本的Hiroshi Hikino从灵芝(Ganoderma lucidum)子实体热水提取物中得到三种降血糖活性的灵芝多糖A、B、C。在对71名糖尿病患者的临床试验中，灵芝糖蛋白Ganopoly也表现出良好并且安全的降血糖作用。可见，灵芝在糖尿病的治疗方面有着很好的前景。

现代药理学研究结果表明，血糖的降低可以通过升高胰岛素的含量，也可通过调节与糖代谢相关酶的活性，而促进葡萄糖的氧化利用，还可通过改善胰岛素抵抗或抑制葡萄糖吸收等而实现。

张玲芝发现灌服灵芝子实体多糖对四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠的胰岛细胞具有一定的修复作用而使内源性胰岛素分泌增加，降低血糖。罗少洪在研究灵芝多糖调节血糖作用时发现，在灌胃剂量达100mg/kg以上时，可明显降低链尿菌素高血糖小鼠血糖水平，无剂量效应关系；在200mg/kg剂量时，可降低正常小鼠的血糖，有明显的刺激胰岛素分泌的作用，并可明显增强高血糖小鼠对葡萄糖的耐受力。陈伟强等也报道对STZ引起的糖尿病小鼠进行灌胃灵芝多糖，能使糖尿病大鼠血糖水平显著下降(p＜0.05)，血清胰岛素水平显著升高(p＜0.05)。灵芝子实体多糖B能增加正常小鼠和四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠的血浆胰岛素水平，并能增强肝葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶和葡萄糖-6磷酸脱氢酶的活性，降低肝6-磷酸葡萄糖和糖原合成酶的活性，但不影响己糖激酶和糖原磷酸化酶的活性；其机制是能升高血浆胰岛素的浓度，加速葡萄糖代谢，提高周围组织对糖的利用，并通过强化参与肝脏糖代谢的各种关键酶的活性来提高肝脏对葡萄糖的利用。Seto发现灵芝水提物能够通过抑制肝脏磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶PEPCK的表达降低2型糖尿病小鼠的血糖。

虽然目前已经发现灵芝及其活性成分具有显著的降血糖作用，但由于其化学结构复杂，绝大多数降血糖活性物质的成分、结构及其作用机理未能明确，直接阻碍了它们被开发成治疗糖尿病新药的进程。

发明内容：

本发明的目的是提供一种具有降血糖作用的新的灵芝多糖F31及其制备方法。

本发明的灵芝多糖F31是通过以下方法制备的，该方法包括以下步骤：

(a)取灵芝(Ganoderma lucidum karst)子实体，粉碎用热水抽提，然后再过滤，在滤液中加入乙醇沉淀，分离沉淀；

(b)沉淀上DEAE Sepharose Fast Flow色谱柱，先用Tris-HCl(10mM，pH＝8.0)平衡，接着用含0.1M NaCl的Tris-HCL(10mM，pH＝8.0)洗脱，最后用含0.5M NaCl的Tris-HCL(10mM，pH＝8.0)洗脱，分别得到馏分F1、F2和F3；馏分F3上分子筛Sephacryl S300，用H₂O平衡，接着用H₂O洗脱，收集有效峰，减压浓缩，透析，干燥得灵芝多糖F31。

所述的步骤(a)的沉淀优选先用热水溶解，再用0.45μm直径的微孔滤膜过滤，滤液装入3000D孔径的透析袋透析，得粗多糖溶液，再调整粗多糖溶液中灵芝粗多糖的浓度，将此粗多糖溶液作为样品进行步骤(b)的上样层析分离。