[发明专利]鼻咽癌易感基因无创检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种鼻咽癌易感基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估鼻咽癌发病的风险级别，并作为预防和治疗鼻咽癌的方向指导。

背景技术

鼻咽癌是指发生于鼻咽腔顶部和侧壁的恶性肿瘤。常见临床症状是鼻塞、鼻涕流血、头痛、耳鸣；晚期侵及颅脑，可出现耳鸣、耳聋、头痛、复视及颈淋巴结肿大。在世界大多数国家，鼻咽癌发病率极低，但在中国南方部分省市和亚洲东南部一些国家其发病率却很高，其中我国南方广东省是世界最高发地区，世界人口标化发病率高达男性约30/10万，女性约13/10万。研究结果表明，鼻咽癌具有显著的地区差异、家族集聚现象和发病率相对稳定等流行病学特征，移民流行病学研究证据和符合分离分析研究结果均提示遗传因素在鼻咽癌的发生发展中具有重要作用。

细胞色素P450超家族是一类重要的代谢酶基因。其编码的CYP450酶能将无活性的前致癌物代谢转变为具有活性的中间产物，这些中间产物具有亲电子性而且可以与DNA共价结合形成加和物，从而损伤DNA及引起癌基因和抑癌基因的改变，导致癌变形成。CYP2E1酶主要代谢活化一些低分子量的化合物，包括亚硝胺类、黄曲霉素B1、苯并芘、四氯化碳等。

TNF是体内具有多种生物活性的重要致炎细胞因子，主要由脂多糖激活的单核、巨噬细胞及淋巴细胞等分泌。TNF有抗病毒、广泛的诱导炎症和免疫调节功能，最突出的是其强大的抗肿瘤特性。从而在自身免疫性疾病、感染性疾病，特别是在恶性肿瘤的发生发展过程中起重要作用。研究表明TNF-βG252A单核苷酸位点多态性与鼻咽癌易感性密切相关，因此可以作为鼻咽癌易感性的危险因素之一。

谷胱甘肽硫转移酶(GSTs)是人体内一类具有重要解毒作用的多基因酶族，其中的GSTM1和GSTT1分别编码GST-μ和GST-θ同功酶，分别对多环芳烃类和环氧化物及杀虫剂中的卤代烷烃类有很强的解毒作用。研究表明GSTT1和GSTM1基因的缺失导致它们编码的同功酶缺失，均可能影响机体对上述毒物的解毒功能，增加宿主对该类致癌物作用的敏感性。有研究表明GSTM1和GSTT1存在人群缺失多态，且地域不同缺失率有差异，中国人GSTM1缺失率偏高，在35％-63％，尤其GSTT1缺失率高达58％，这部分人群相当于增加了环境毒素和致癌物质的浓度，提高了个体罹患一系列类型癌症的风险。国内外研究表明，携带GSTM1和GSTT1缺失型的个体，鼻咽癌的风险增加，因此GSTM1/GSTT1缺失型是中国人群重要的鼻咽癌遗传易感因素之一。

综上所述，鉴于CYP2E1基因上Rsal1多态性，TNF-β基因上G252A位点多态性，GSTM1基因缺失与否(Present/Null)，GSTT1基因缺失与否(Present/Null)在鼻咽癌变过程中有着不可忽视的作用，可以将上述基因作为遗传易感因素来检测出受检者在鼻咽癌发生相关的基因单核苷酸位点基因型，及时筛查出易患鼻咽癌的高危人群，从而有针对性的预防和治疗鼻咽癌，这对于降低鼻咽癌的发病率有非常重要的意义。

发明内容

基于CYP2E1基因上Rsal1多态性，TNF-β基因上G252A位点多态性，GSTM1基因缺失与否(Present/Null)，GSTT1基因缺失与否(Present/Null)的4个单核苷酸多态性位点基因型可作为评估鼻咽癌发病的危险因子的基础上，本发明提供一种鼻咽癌易感基因检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测CYP2E1基因上Rsal1多态性，TNF-β基因上G252A位点多态性，GSTM1基因缺失与否(Present/Null)，GSTT1基因缺失与否(Present/Null)的4个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等)；

PCR产物纯化组件(包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等)；

DNA测序反应组件(包括BigDye mix，EDTA溶液、100％乙醇溶液、70％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等)。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液2.5ul；25mM dNTP混合液0.2ul；5U/ul Taq DNA聚合酶0.125ul；20uM特异性引物对(每条引物各0.25ul)；ddH2O19.175ul。