[发明专利]大肠癌易感基因无创检测试剂盒

权利要求书

1.一种检测大肠癌易感基因的无创检测试剂盒，其组成成分为：检测CYP2E1基因上单核苷酸多态性位点RsaI(rs1051740)，hMLH1基因上单核苷酸多态性位点T1151A，GSTM1基因是否缺失(Null/Present)，GSTT1基因是否缺失(Null/Present)，MTHFR基因上单核苷酸多态性位点C677T(rs1801133)基因型的PCR特异引物与DNA测序引物、Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、SAP酶、ExoI酶、BigDye mix、EDTA溶液、70％乙醇溶液、100％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH₂O等。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特点在于：所述的特异性引物对是指针对CYP2E1基因上单核苷酸多态性位点RsaI(rs1051740)，hMLH1基因上单核苷酸多态性位点T1151A，GSTM1基因是否缺失(Null/Present)，GSTT1基因是否缺失(Null/Present)，MTHFR基因上单核苷酸多态性位点C677T(rs1801133)，能特异性扩增出包含5个SNPs位点的DNA片段的引物对。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特点在于：所述的DNA测序引物是针对CYP2E1基因上RsaI(rs1051740)，GSTM1基因是否缺失(Null/Present)，GSTT1基因是否缺失(Null/Present)，MTHFR基因上单核苷酸多态性位点C677T(rs1801133)，能通过DNA测序技术特异性检测出上述5个SNPs位点基因型的DNA测序引物。

4.根据权利要求1所示的试剂盒，其所含的5对特异性引物序列如下：

(1)CYP2E1 RsaI正向引物：5′AAGTGATTTGGCTGGATTGTA3′

   CYP2E1 RsaI反向引物：5′CATTGGACTGGATGGTGC3′

(2)hMLH1 T1151A正向引物：5′ACAGACTTTGCTACCAGGACTTG3′

   hMLH1 T1151A反向引物：5′TGTCTTATCCTCTGTGACAATG3′

(3)GSTM1(Null/Present)正向引物：5′GAACTCCCTGAAAAGCTAAAGC3′

   GSTM1(Null/Present)反向引物：5′GTTGGGCTCAAATATACGGTGG3′

(4)GSTT1(Null/Present)正向引物：5′TTCCTTACTGGTCCTCACATCTC3′

   GSTT1(Null/Present)反向引物：5′TCACCGGATCATGGCCAGCA3′

(5)MTHFR(C677T)正向引物：5′AGGGAGGCTTCAACTACGC3′

   MTHFR(C677T)反向引物：5′GCGGTTGAGGGTGTAGAAGT3′ 。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所含的5条DNA测序引物序列如下：

(1)CYP2E1 RsaI测序引物：5′AAGTGATTTGGCTGGATTGTA3′

(2)hMLH1 T1151A测序引物：5′ACAGACTTTGCTACCAGGACTTG3′

(3)GSTM1(Null/Present)测序引物：5′GAACTCCCTGAAAAGCTAAAGC3′

(4)GSTT1(Null/Present)测序引物：5′TTCCTTACTGGTCCTCACATCTC3′

(5)MTHFR(C677T)测序引物：5′GCGGTTGAGGGTGTAGAAGT3′。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于试剂盒的组分和含量包括：

(1)PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液2.5ul，25mM dNTP混合液0.2ul，5U/ul Taq DNA聚合酶0.125ul，20uM特异性引物对，每条引物各0.25ul，ddH2O 19.175ul。

(2)PCR产物纯化体系：1U/ul SAP酶0.75ul，10U/ul ExoI酶0.375ul，ddH2O 3.875ul。

(3)测序反应体系：25％BigDye mix1ul，3.2uM DNA测序引物1ul，125mMEDTA溶液1ul，100％乙醇溶液15ul，70％乙醇溶液30ul，HIDI溶液8ul，ddH2O2ul。

本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。