[发明专利]一种从芒果果皮中分离纯化芒果苷的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然化合物的提取分离纯化技术领域，具体涉及以芒果果皮为原料，采用液液萃取，大孔树脂和HSCCC的联用技术分离纯化芒果苷的方法。

背景技术

芒果苷（mangiferin）， 别名芒果素，莞知母宁，分子式：C₁₉H₁₈O₁₁，分子量：422.34，CAS号：4773-96-0，是一种四羟基吡啶的碳糖苷，属于双苯吡酮类化合物。芒果苷存在于漆树科植物芒果（Mangifera indica L.）的果实、叶、树皮，百合科植物知母（Anemarrhena asphodeloides Bge.）的根茎、地上部分，鸢尾科植物射干[Belamcanda chinensis（L.）DC.]的花、叶等植物中。芒果苷结构式如下：

近年研究表明，芒果苷具有较强的抗氧化，消炎，抑菌，免疫调节，抑制肿瘤以及降血糖等活性，受到人们的广泛关注。现有提取纯化芒果苷的原料大多集中于药材和芒果叶中，技术手段多采用碱液提取或一定浓度的醇提取结合结晶获取芒果苷，但这些工艺比较粗放，得到的芒果苷产品纯度不能保证。

近年来，大孔树脂结合高速逆流色谱技术提取纯化高纯度天然产物已在很多方面取得成功，但利用芒果果皮采用大孔树脂和高速逆流色谱联用技术纯化获得高纯度芒果苷（98%以上）的研究未见报道。芒果作为一种美味的热带水果深受人们喜爱，然而，芒果果皮占果实10%左右（重量），在果实加工或鲜食过程中都成为废弃物，研究从芒果果皮中提取高纯度的芒果苷不仅可以变废为宝，在一定程度上还可以给芒果的深加工提供思路，并可为芒果苷药理作用及其相关功能活性的研究提供技术支撑和工作基础，最大程度地提高芒果的附加值。

发明内容

本发明的目的是提供一种从芒果果皮分离纯化芒果苷的方法，通过以下步骤实现：

（1）粗提物的准备：一定质量干燥的芒果果皮粉末，用石油醚（固液比1:20）浸泡2 h，超声30 min，过滤去掉石油醚，滤渣45℃减压蒸干石油醚后再用提取液（甲醇：乙醇：丙酮1:1:1, v/v/v）超声提取两次（固液比1:20），过滤，合并两次滤液，浓缩蒸干得浸膏，然后溶于ddH₂O中；

（2）乙酸乙酯萃取：将步骤（1）得到的粗提水溶液经过乙酸乙酯等体积萃取两次，上相合并后再经水等体积萃取一次后，合并下相溶液45℃减压蒸出溶液中残留的乙酸乙酯；

（3）将（2）步骤得到的提取液上样HPD100大孔树脂，上样流速2 ml/min。上样后的HPD100大孔树脂先用水和5%乙醇各10 BV（柱床体积）洗脱以去掉极性较高的杂质，然后用10 BV 30%乙醇洗脱芒果苷，洗脱流速为2 ml/min，收集30%洗脱液，在旋转蒸发仪上45℃蒸干得大孔树脂粗提物粉末；

（4）分离纯化芒果苷：配制乙酸乙酯-正丁醇-水（4:1:5）溶剂体系，充分摇匀过夜后，将上下相分开，超声脱气，上相为固定相，下相为流动相，将固定相以20 ml/min流速泵入高速逆流色谱仪（HSCCC），稳定后，调节逆流色谱仪转速800 rpm，同时流动相以2 ml/min流速泵入HSCCC，待流出液分层后进样大孔树脂粗提物粉末，根据HSCCC图谱收集出峰处各组分（每管1.8 ml），并对各管样品进行HPLC检测，合并含有单一芒果苷的各管样品，在旋转蒸发仪上蒸干即得到高纯度的芒果苷，回收率≥70%，产品纯度均≥98%。本发明纯化得到的芒果苷经过高效液相色谱（HPLC）和质谱（MS）鉴定，与文献报道一致。

现有提取纯化芒果苷的原料大多集中于药材和芒果叶中，且技术手段多采用碱液提取或一定浓度的醇提取大孔树脂纯化后结晶获取的芒果苷，利用芒果果皮采用大孔树脂和高速逆流色谱联用技术纯化获得高纯度芒果苷（98%以上）的研究未见报道。本发明采用液液萃取，大孔树脂和HSCCC的联用技术，以芒果果皮干燥粉末为原料分离纯化得到高纯度的芒果苷。本发明相对于过去的工艺有如下优点：（1）生产流程安全易操作；（2）生产周期短；（3）纯化产物回收率高，纯度高；（4）整个纯化过程通过HPLC进行精确定量，准确度高；（5）HSCCC所用的溶剂可回收后重复利用，成本较低。

附图说明

图1为本发明的工艺流程图。

图2为‘绿皮芒’果皮粗提液HPLC色谱图。

图3为乙酸乙酯萃取后下相HPLC色谱图。

图4为HPD100大孔树脂纯化所得样品的HPLC色谱图。