[发明专利]磺胺类药物半抗原及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种半抗原及其制备方法和应用，具体涉及磺胺类药物半抗原及其制备方法和应用。

技术背景

磺胺类药物(Sulfonamides，SAs)是一类具有对氨基苯磺酰胺结构、用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物。因具有广谱、稳定、经济、易用以及联合抗菌增效剂效果可提高数十倍的特点，常以亚治疗浓度的药物做为饲料添加剂来预防疾病的发生，提高饲料的转化率和促进动物生长，其中常用的SAs就有十几种。但该类药物存在严重副作用，人体中长期存在会导致许多细菌对磺胺类药物产生耐药性，且有潜在的致癌性，因此已引起了国内外的高度重视。我国以及美国、欧盟等国家规定了动物性食品中总磺胺以及单个磺胺的最高残留限量(MRLs)为0.1mg/kg，其中磺胺二甲基嘧啶(SM2)的MRLs为0.025μg/ml。

目前，磺胺类药物残留的检测方法主要有微生物学法、理化分析方法和免疫法等。微生物学法简便、费用低，但操作费时且敏感性、特异性都较差，在定性定量上都存在困难，不能满足现代残留检测的需要，甚至有些检测结果还达不到最高残留限量的要求；理化法常作为确证方法用于测定动物组织中的药物残留，如气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)、气-质联用(GC-MS)、液-质联用(HPLC-MS)等，这些方法灵敏、准确，特异性强、分离度好，可以同时测定多种药物，但需要昂贵的仪器、样品的前处理复杂、繁琐费时、检测的成本较高，不能现场操作，而且需专业人员操作，所以限制了其应用；与之相比，酶联免疫方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便、检测成本低、适合于批量样品的筛选检测等优点，而且所需设备少，操作简单易学，成本低廉，能够更好地满足我国畜禽养殖户、屠宰场、食品企业、政府职能监管部门等开展检测工作。

发明内容

本发明的目的是提供一种磺胺类药物半抗原及其制备方法。

本发明提供的磺胺类药物半抗原，分子结构式为：

本发明提供的磺胺类药物半抗原的制备方法，包括如下步骤：

a)于25ml单口瓶中加入6-氨基烟酸、乙醇和12mol/L盐酸，加热回流，反应8h，TLC监测，反应完毕，减压除去溶剂，溶于饱和NaHCO₃水溶液，乙酸乙酯萃取，无水Na₂SO₄干燥，柱层析(乙酸乙酯/石油醚，2/1，v/v)纯化；

b)于25ml单口瓶中加入a)所得产物、三乙胺(Et₃N)和CH₂Cl₂，搅拌溶解后，加入催化剂4-二甲氨基吡啶(DMAP)。缓慢滴入4-乙酰氨基苯磺酰氯的二氯甲烷溶液，TLC监测，5h，反应完毕后处理，干燥，柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚，1/10，v/v)；

c)于25ml单口瓶中加入b)所得产物和2mol/L NaOH水溶液，加热回流，TLC监测，反应10h，完毕，调节pH4～5，有固体析出，即为磺胺类药物半抗原。

本发明的另一个目的是上述磺胺类药物半抗原在免疫检测中的应用，具体包括由所述磺胺类药物半抗原与载体蛋白偶联得到的磺胺类药物抗原，及由所得磺胺类药物抗原免疫动物制备得到的磺胺类药物抗体。

其中所述载体蛋白可为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原，

所述抗体为磺胺类药物单克隆抗体。

本发明还提供由上述磺胺类药物抗体制备的酶联免疫试剂盒，及其在检测动物源性样本中磺胺类药物残留的应用。

本发明提供的磺胺类药物半抗原既最大程度地保留了磺胺母核的化学结构，又通过化学合成改造引入了可以与蛋白质偶联的—COOH，合成方法简单，纯度、产率较高；用该半抗原作为原料，制备适于动物免疫的抗原体系免疫动物，所得抗体的效价、特异性、亲和力都比较好；所得的抗体用于酶联免疫试剂盒，可以同时检测磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺噻唑、酞酰磺噻唑、磺胺甲噻二唑、磺胺吡啶七种药物，使用方便、检测成本低、检测方法高效、准确、快速、可同时检测大批量的样本，适于动物源性样本中磺胺类药物残留的现场监控和大量样本的筛查。本发明的磺胺类药物半抗原在磺胺类药物的检测中发挥重要作用。

附图说明

图1：磺胺类药物半抗原合成路线图

图2：磺胺类药物半抗原核磁共振氢谱图

图3：磺胺类药物酶联免疫试剂盒标准曲线

具体实施方式