[发明专利]一种高产肝素酶Ⅰ的原核表达载体的构建方法无效
| 申请号： | 201210052690.6 | 申请日： | 2012-03-02 |
| 公开（公告）号： | CN102618568A | 公开（公告）日： | 2012-08-01 |
| 发明（设计）人： | 于平 | 申请（专利权）人： | 浙江工商大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/60;C12N1/21 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 徐关寿 |
| 地址： | 310018 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高产 肝素 表达 载体 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种高产肝素酶Ⅰ的原核表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)以F1和R1为引物，
F1：5’-TAGAATTCCAGCAAAAAAAATCCG -3’
R1：5’-GGCAAGCTTGTCTGGCAGTTTCGCTGTA -3’
利用PCR反应扩增得到如SEQ ID NO.1所示的编码肝素酶Ⅰ的基因序列；
(b) 将上述编码肝素酶Ⅰ的基因序列连接至pET-28a载体上，得重组表达载体pET28a-HpaI；
(c) 将重组表达载体pET28a-HpaⅠ质粒转入大肠杆菌BL21菌株。
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤a中，PCR反应体系为： 10×Buffer 5μl， MgCl2 3μl， dNTP 1μl， DNA 1μl， Taq酶0.5μl，引物混合物2μl，双蒸水37.5μl；反应参数为： 97℃5min， 97℃50s、55℃50s、72℃1min 共30个循环， 最后在72℃延伸10min。
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