[发明专利]一种携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱的获得方法及其应用

权利要求书

1. 一种携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱的获得方法，其特征在于包括如下步骤：

1）白背飞虱的获得：

从非南方水稻黑条矮缩病毒发生地区的水稻田间采集捕获白背飞虱若虫后在室内用非抗虫水稻品种的无毒稻苗饲养，待白背飞虱成虫交配后单头虫单独产卵，随机抽取群体中10%的白背飞虱用RT-PCR和dot-ELISA方法检测带毒情况，保留不带毒雌虫的后代并建立室内种群，以后每代随机抽取种群中10%的白背飞虱用RT-PCR和dot-ELISA方法确定白背飞虱不携带南方水稻黑条矮缩病毒，即获得不携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱；

2）白背飞虱的获毒：

白背飞虱从冷冻保存的水稻或玉米病株中获毒：

饲毒前，白背飞虱在滤纸保湿的烧杯中饥饿1～3小时；从-10℃至-80℃保存冰箱中取出冷冻保存的病株，放置温室或4℃冰箱中解冻1～3小时后移入烧杯内，每个烧杯放1～10株病株；接入20～300头1～2龄无毒的白背飞虱，烧杯用尼龙纱布封口；把烧杯放入温室或植物生长箱内饲养，温度为26～30℃，相对湿度为60 %～75 %，光周期为16L：8D；饲毒1～2天后将存活的白背飞虱移入生长于温室或植物生长箱的健康水稻苗上喂养，温度为26～30℃，相对湿度为60 %～75 %，光周期为16L：8D，直至渡过病毒的循回期，约12～15天；用RT-PCR、dot-ELISA方法检测白背飞虱体内的南方水稻黑条矮缩病毒，分析其带毒率，获得携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱；

或者，白背飞虱从种植于温室或植物生长箱内的水稻或玉米病株上获毒：  

饲毒前，白背飞虱在滤纸保湿的烧杯中饥饿1～3小时；感染南方水稻黑条矮缩病毒的水稻或玉米病株，用尼龙纱布封口的圆形开口塑料容器封闭在温湿度控制的植物生长箱中培养，每个塑料容器放1～5株病株植物；每个装置中放入20～200头1～2龄无毒的白背飞虱，饲喂培养温度为26～30℃，相对湿度为60 %～75 %，光周期为16L：8D；饲毒2～7天后将存活的白背飞虱移入新鲜健康水稻苗上饲养直至渡过病毒的循回期，约12～15天；用RT-PCR、dot-ELISA方法检测白背飞虱体内的南方水稻黑条矮缩病毒,分析其带毒率，获得携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱。

2.一种如权利要求1所述方法获得的携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱的应用，其特征在于所述的携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱用于饲喂健康水稻苗来鉴定水稻品种的抗性，用于筛选水稻的抗病品种，并为抗南方水稻黑条矮缩病毒抗病育种服务。

3.如权利要求2所述的一种携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱的应用，其特征在于所述的携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱用于饲喂健康水稻苗来鉴定水稻品种抗性的方法为：将携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱移入待鉴定的种植于温室或植物生长箱的1.5-3叶期水稻苗，采用单苗5头虫方法接种待鉴定水稻品种，饲养2-7天后移出全部白背飞虱，将稻苗移栽至温室或植物生长箱内，培养温度为26-30℃，相对湿度为65 %-75 %，光周期为16L：8D；7天以后开始观察病毒症状，连续调查20-30天；用RT-PCR和dot-ELISA方法检测水稻；根据饲喂接毒水稻的病毒症状及其RT-PCR和dot-ELISA检测结果判断水稻的抗性。

4.一种如权利要求1所述方法获得的携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱的应用，其特征在于所述的携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱用于筛选抗南方水稻黑条矮缩病毒特异、灵敏的单抗，从而建立以单抗为核心的检测水稻及白背飞虱体内南方水稻黑条矮缩病毒的免疫学方法。

5.一种如权利要求1所述方法获得的携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱的应用，其特征在于所述的携带南方水稻黑条矮缩病毒的白背飞虱用于研究南方水稻黑条矮缩病毒与介体昆虫之间的互作及其传毒机理提供物质基础。