[发明专利]鳕鱼成分的实时荧光PCR检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和核酸检测技术领域。具体地，本发明涉及食品或饮料中鳕鱼成分的实时荧光PCR检测方法和试剂盒。

背景技术

鳕鱼是主要食用鱼类之一。目前鳕鱼主要出产国是加拿大、冰岛、日本、挪威及俄罗斯。鳕鱼是全世界年捕捞量最大的鱼类之一，具有重要的经济价值。市场价值也较昂贵，每斤在百元以上。然而，目前鳕鱼及其制品的造假掺伪现象严重。2009年9月，北京媒体以《超市“鳕鱼”多非真品，食用或有腹泻等不良反应》为题报道了类似情况。

从2009年开始，全国多个城市都出现过将油鱼冒充鳕鱼卖，导致消费者出现腹泻问题的报道。据称几年前麦当劳使用的鳕鱼也是油鱼。油鱼是棘鳞蛇鲭和异鳞蛇鲭的通称，外形与鳕鱼长得有些近似，但并非一个种群。油鱼含有人体不能消化的蜡脂，人体难以消化；部分人食用油雨后会累积于直肠，会导致腹泻、肠胃痉挛等不适。油鱼的商业价值并不高，属低价鱼类，因为含油量高，主要用于提炼工业用润滑剂。油鱼已被欧美多个国家列入禁止食用名单，不少国家禁售或不建议国民食用油鱼。美国曾于上世纪90年代禁运该鱼，现已经解禁，但美国食品药品监督管理局仍然反对进口和州际交易油鱼。日本厚生劳动省列油鱼为“有毒鱼”，禁止入口。欧盟出售蛇鲭科鱼制品时，须以包装形式出售；必须加上适当标签，提供有关烹调方法的资料；必须标示有关鱼类可造成肠胃不适的风险；标签必须附有学名及俗名。意大利官方列为禁止入口鱼种。澳大利亚公告为不建议食用鱼类。新加坡政府要求业界必须正确标示两种鱼类，并建议采用烤的烹调方法，减少当中的油分。2007年8月，香港食物安全中心推出《有关识别及标签油鱼/鳕鱼的指引》，建议所有入口商都应将棘鳞蛇鲭和异鳞蛇鲭的俗名定为“蜡油鱼”和“oilfish”，同时不可使用“鳕鱼”等其他俗名，以供业界和消费者分辨。由于目前市面出售的鱼都是去头、切块销售，消费者凭外观很难分辨。

因此，目前迫切需要开辟一些检测、区分鳕鱼成分的简单、快速、实用的方法，从而有利于规范市场，保障大众的饮食健康。

发明内容

本发明的目的在于提供鳕鱼成分的实时荧光PCR检测方法。

在本发明的第一方面，提供一种鉴定鳕鱼成分的方法，所述方法包括：

以待测样品的DNA为模板，以SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的引物进行PCR扩增；若发生特异性扩增，则表明待测样品中包含鳕鱼成分。

在一个优选例中，以SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的引物以及SEQID NO：3所示的Taqman探针进行实时荧光PCR检测。

在另一优选例中，所述的待测样品是食品或饮料。

在另一优选例中，所述方法的检测灵敏度为10^-2ng/μL DNA。

在本发明的另一方面，提供一种引物，所述引物是引物对，其序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

在本发明的另一方面，提供一种Taqman探针，所述的探针序列如SEQ ID NO：3所示。

在本发明的另一方面，提供所述的引物和/或所述的Taqman探针的用途，用于从待测样品中鉴定鳕鱼成分。

在本发明的另一方面，提供一种鉴定鳕鱼成分的试剂盒，其中包括所述的引物和/或所述的Taqman探针。

在一个优选例中，所述试剂盒中还包括：含有鳕鱼成分的检测标准品。

在另一优选例中，所述试剂盒中还包括选自以下的试剂：DNA提取试剂，Taq酶，PCR缓冲液，DNA聚合酶，和/或说明鉴定鳕鱼成分的方法的使用说明书。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

图1、鳕鱼成分的物种特异性实时荧光PCR检测图。

图2、鳕鱼DNA配比的实时荧光PCR检测灵敏度图。扩增曲线从左到右分别是：100ng/μL鳕鱼DNA；10ng/μL鳕鱼DNA；1ng/μL鳕鱼DNA；0.1ng/μL鳕鱼DNA；0.01ng/μL鳕鱼DNA。

图3、鳕鱼粉重量比的实时荧光PCR检测灵敏度图。扩增曲线从左到右分别是：10％(W/W)鳕鱼粉；1％(W/W)鳕鱼粉；0.1％(W/W)鳕鱼粉；0.01％(W/W)鳕鱼粉；0.001％(W/W)鳕鱼粉。

具体实施方式