[发明专利]磺胺二甲嘧啶分子印迹仿生识别试剂盒及制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属分析化学领域，具体涉及一种磺胺二甲嘧啶分子印迹仿生识别试剂盒，同时还涉及一种磺胺二甲嘧啶分子印迹仿生识别试剂盒的制备方法，还涉及磺胺二甲嘧啶分子印迹仿生识别试剂盒在动物性食品残留分析中的应用。

背景技术

磺胺二甲嘧啶(Sulfamethazine，SM₂)是一种用于防治细菌和原虫感染的化学抗菌药物。该类药属于慢速抑菌剂，可产生明显的肾毒性、骨髓抑制和皮疹等不良反应。由于其价格低廉、抗菌谱较广，目前在畜牧业中应用非常广泛，但随之而来的是其滥用和误用现象也逐渐增多，由此导致的动物性食品中该药的残留也越来越严重。为了监控该药所引起的残留，保障人类健康，美国食品与药物管理局(Food and Drug Administration，FDA)、欧盟(European Union，EU)、联合国食品法典委员会(Codex Alimentarius Commission，CAC)以及我国农业部等均规定了该类药物的最大残留限量(Maximum Residue Limit，MRL)。欧盟规定所有磺胺类药物的总残留量不能超过100μg/kg；FDA规定不同种类磺胺类药物的MRL为0μg/kg-100μg/kg；CAC规定磺胺二甲嘧啶在牛奶中的MRL为25μg/kg，在其他动物性食品中的MRL为100μg/kg；我国农业部规定牛奶中磺胺二甲嘧啶的MRL为25μg/kg，而在其他动物性食品中所有磺胺类药物的总残留量不超过100μg/kg。

在所有的磺胺类药物中磺胺二甲嘧啶的使用最广泛，残留最严重，危害最大，该药在动物组织中的残留对人体和自然环境的都有很多不利影响。已经确认由该类药物残留引起的人体组织损伤大约95％是由磺胺二甲嘧啶引起的。美国农业部食品安全监督署发布的年度残留计划检测报告显示，在连续多年的监控中所检测出来的超标样品中有90％以上是磺胺二甲嘧啶。在我国虽未见到具体数据，但根据生产中的实际情况，磺胺二甲嘧啶的残留状况也非常严重，且为该类药物残留超标的主要原因。另外，该药的多种检测方法也存在很多不足。传统意义上的仪器分析方法常不能独立进行，且检测过程和样品的前处理大多费时、费力、影响因素众多。免疫分析技术则需要制备结合抗原和有特异性识别作用的抗体，对目标分子的结构也有一定的限制，同时分析过程的稳定性较差。微生物检测方法的特异性和准确度不高，需要对分析对象具有专一性敏感的菌种，且只能定性检测。总之，以上几种方法对操作的条件要求均较高，所需物品的保存条件苛刻，而分析的效果还不能令人们满意。

酶联免疫吸附分析(Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA)是一种传统的非均相免疫分析技术，由于其具有成本低、操作简便、重复性好、可以实现高通量筛选测定等优点，在实际的检疫检验工作得到了广泛的应用。但是传统的ELISA方法是基于生物性的抗体作为识别元件的，而特异性抗体的制备过程繁琐、周期很长且对外界的环境条件耐受能力较差。分子印迹技术作为一种能够获得在空间和结合位点上与某种分子完全匹配的聚合物的制备技术，具有构效的预定性、识别的特异性和广泛的实用性。而且由于分子印迹聚合物对目标分子具有高度的选择性识别作用，较生物性的抗体具有稳定性和重复性好、耐极端环境能力强、制备过程简便、成本低廉，因此将印迹聚合物用于待测物质的识别和检测较其他方法具有极大的优势。目前已在生物传感和痕量物质的富集等领域展示出诱人的前景。

参考相关文献的报道，用沉淀聚合的方法制备磺胺二甲嘧啶的分子印迹聚合物(Molecular Imprinting Polymers，MIPs)，所制备的MIPs经洗脱、漂洗和干燥等一系列处理后，再通过紫外分光光度法对其进行评价分析即得到具有高效识别性能的聚合物微球。聚合物微球对酶标板包被后，可进行分子印迹仿生识别检测。

发明内容

本发明的目的是在于提供一种磺胺二甲嘧啶分子印迹仿生识别试剂盒，该试剂盒成本低廉、操作方便、准确性高和适应性强，可用于动物源性食品中磺胺二甲嘧啶残留分析和测定，在猪肌肉和肝脏中最低检测限分别为22.9ng/g与34.1ng/g。

本发明的另一个目的是在于提供了一种磺胺二甲嘧啶分子印迹仿生识别试剂盒的制备方法，该方法工艺简单，操作简便。

本发明的再一个目的是在于提供了一种磺胺二甲嘧啶分子印迹仿生识别试剂盒在动物性食品残留分析中的应用，为动物源性食品安全检测提供了更多的选择。

为了实现上述的目的，本发明是通过以下技术方案实现：