[发明专利]一种病毒释放缓冲液的制备及其应用

权利要求书

1.一种病毒释放缓冲液, 其特征在于，所含组分及各组分的质量含量如下：

氯化钠(NaCl):                 7-25g；

氯化钾(KCl):               0.00-5.0g；

氯化镁（MgCl2）：            0.5-2.5g；

磷酸氢二钠(Na2HPO4):        0.1-3.0g；

乙二胺四乙酸（EDTA）:       0.15-1.5g；

甘氨酸：                    1-6.0g；

谷氨酰胺：                  1-5.0g；

组氨酸：                    0.5-2.0g；

丝氨酸：                   1-10g；

赖氨酸：                   1-10g；

精氨酸：                   5-8g；

吐温-80：                  0.5-2.0 g；

曲拉通X-100：              0.1-20g；

甘油：                     2-18g；

按配方称量以上试剂，全部溶解于蒸馏水中，调整pH为7.0-7.5，最终溶液体积定容为1L，即得所述病毒释放缓冲液。

2.用权利要求1所述的病毒释放缓冲液提高胚液病毒滴度的方法，其特征在于，包括如下具体步骤：

步骤A：分别取所述病毒释放缓冲液和病毒胚液；

步骤B：将病毒胚液中速离心，即以6000-9000r/min的速率离心15-60min，分离沉淀一和上清液一；

步骤C：按沉淀质量：病毒释放缓冲液质量1：10-100向所得沉淀中加入所述病毒释放缓冲液，混合均匀后，在2-8℃以1000-5000r/min的搅拌速率，搅拌10-30min，然后再次中速离心，分离沉淀二和上清液二；

步骤D:所得上清液二和所得上清液一混合后横向切流浓缩；或将所得上清液二和所得上清液一分别横向切流浓缩后混合；横向切流浓缩所用的滤膜的孔径为10-500KDa，胚液浓缩倍数为浓缩2-10倍；得到病毒胚液的浓缩液。

3.如权利要求2所述的提高胚液病毒滴度的方法，其特征在于，横向切流浓缩所用的滤膜的孔径为30-150KDa。

4.如权利要求2所述的提高胚液病毒滴度的方法，其特征在于，横向切流浓缩所用的滤膜的孔径为50-100KDa。

5.用权利要求1所述的病毒释放缓冲液所述病毒释放缓冲液制备多联苗的方法，包括如下具体步骤：

步骤A：分别取所述病毒释放缓冲液和病毒胚液；

步骤B：将病毒胚液中速离心，即以6000-9000r/min的速率离心15-60min，分离沉淀一和上清液一；

步骤C：按沉淀质量：病毒释放缓冲液质量1：10-100向所得沉淀中加入所述病毒释放缓冲液，混合均匀后，在2-8℃以1000-5000r/min的搅拌速率，搅拌10-30min，然后再次中速离心，分离沉淀二和上清液二；

步骤D:所得上清液二和所得上清液一混合后横向切流浓缩；或将所得上清液二和所得上清液一分别横向切流浓缩后混合；横向切流浓缩所用的滤膜的孔径为10-500KDa，胚液浓缩倍数为浓缩2-10倍；得到病毒胚液的浓缩液。

6.步骤E:将按步骤A、B、C和D制备的多个不同病毒胚液的浓缩液混合，即得多联苗。