[发明专利]直接分析通过胶带剥离获得的皮肤样品中的皮肤胆固醇

说明书

本申请是2005.04.28提交的CN200580013893.2，题为“直接分析通过胶带剥离获得的皮肤样品中的皮肤胆固醇”的分案申请。

发明领域

本发明涉及测定皮肤胆固醇的方法。更具体地说，本发明涉及直接测定通过胶带剥离获得的皮肤样品中皮肤胆固醇的方法，用于判断个体是否患有动脉硬化、以及是否具有发展成动脉硬化及与高胆固醇相关的和由高胆固醇引起的类似疾病的风险。

发明背景

许多研究表明，动脉硬化及其并发症，如心脏病发作和休克，在几乎所有的国家都是发病和死亡的主要原因。

要想有效地预防动脉硬化就需要确定一个人是否有患动脉硬化的风险，从而采取适当的治疗措施并改变其生活方式。确定哪些人属于高风险人群虽然是我们所期望的，但是，要找出确定一个人是否有患病风险的最佳方法却是有困难的。

一种确定一个人是否有患动脉硬化风险的被广泛使用的方法是测定静脉血浆中的总胆固醇水平(Consensus Conference on Lowering Blood Cholesterol to Prevent Heart Disease，JAMA，1985，253，pg.2080)。如果患者的胆固醇水平超过240mg/dL，那么这个患者就被认为是高风险人群，最近有人提议将此阈值降低到更低的水平。

然而，单纯凭一个总胆固醇指标无法精确地预测患者的患病风险。更好的预测方法是分析血浆脂蛋白；尤其是测定低密度脂蛋白和高密度脂蛋白(HDL)胆固醇水平(Total and High Density Lipoprotein Cholesterol in the Serum and Risk of Mortality，British Medical Journal，1985，290，pg.1239-1243)。

利用上述方法虽然有其优点，但是这种方法需要在禁食一段时间后采集血液样本。而且，采血令人不舒服，有感染的风险，分析血浆脂蛋白和胆固醇水平复杂而昂贵。另外，研究表明，血浆分析并不能完整反映胆固醇在动脉壁和其他组织内的累积过程。在许多情况下，血浆胆固醇水平甚至完整的脂质检测与动脉硬化的严重程度并不完全相关。

胆固醇水平的升高既发生在组织内，也发生在血浆中，研究表明组织胆固醇在动脉硬化的发展中起主导作用。现已证实，组织，其中包括皮肤，以与动脉壁相同的方式累积胆固醇，研究表明动脉壁和皮肤内的胆固醇含量呈密切相关关系。例如，从冷冻的皮肤样本中提取胆固醇，利用传统的化学和生物化学方法测定(Nikitin Y.P.，Gordienko I.A.，Dolgov A.V.，Filimonova T.A.″Cholesterol content in the skin and its correlation with lipid quotient in the serum in normals and in patients with ischemic cardiac disease″，Cardiology，1987，II，No.10，P.48-51)。这种方法虽然有用，但是很复杂，用于大规模的人群筛选时是很痛苦的。

美国专利No.4,458,686描述了一种在皮肤之下或其表面直接测定血液中各种组分的方法。该方法的根据是利用电化学方法，如通过极谱分析法，测定氧浓度的变化。如果使用的是不会透过皮肤扩散的非挥发性物质，就需要在皮肤下植入酶以影响皮肤表面氧的变化。该专利还公开了使用胆固醇氧化酶通过该方法定量测定胆固醇含量的用途。由于该方法需要复杂的设备和操作过程，因而需要高技能的人员来完成测定，从而限制了该方法用于筛选大量的人群。

皮肤胆固醇含量的测定可用于确定动脉硬化的严重程度，通过标准的实验室分析方法分析皮肤活检样品就可以完成。但是，在采集皮肤样品时是很痛苦的，并且采样点有感染的风险。另外，该方法还有一个缺点，那就是较厚的皮肤标本包括几层皮肤，有最外面的角质层、表皮和真皮。由于真皮层是高度血管化的，因此皮肤活检样品含有血管和血管成分。还可能含有汗腺和皮脂腺及其所包含的分泌物。另外，真皮下就是皮下脂肪，皮下脂肪也可能包含在标本内。因此，皮肤活检标本成分复杂，在分析皮肤的胆固醇含量时会得到不真实的数据。