[发明专利]藤梨根提取物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药提取物，具体的说是藤梨根提取物及其制备方法。

背景技术

藤梨根内含黄酮类、三萜类、酚类、蒽醌类、甾体类和糖类等化合物，藤梨根别名圆枣子、藤梨、洋桃藤，具有健胃、清热、利湿的功效，在民间常用于食道癌、胃癌、大肠癌、乳腺癌的治疗，并取得了一定的疗效。并且在临床上，藤梨根在抗肿瘤方面，抗炎和抗病毒方面，抗氧化和保肝方面，免疫调节等方面，均有应用。许多研究认为，藤梨根的这些作用与其黄酮类成分有密切关系。藤梨根提取物由于成分复杂而使制成的制剂不可避免的出现粗、大、黑的缺点，且提取物中含有吸湿性成分限制了剂型的选择，因此对藤梨根提取物需要进行纯化，使纯化后的产品符合中药新剂型的需要。

中药黄酮类化合物的纯化，传统采用溶剂萃取法和聚酰胺柱层析，但溶剂萃取操作麻烦，且萃取过程易乳化，萃取所用的有机溶剂如氯仿、乙酸乙酯等具有不同程度的毒性。聚酰胺纯化对藤梨根中的黄酮类成分而言吸附较差。因此，上述两种方法在藤梨根黄酮类成分的纯化中不够理想，而大孔树脂在中药提取物纯化中的应用日渐广泛，已用于纯化黄酮等中药成分。

发明内容

本发明的目的在于：克服现有技术中存在的不足之处，提供制备方便，疗效好的藤梨根提取物及其制备方法。

本发明是这样实现的：藤梨根用40-80％的乙醇回流，提取三次，合并提取液，浓缩，浓缩液上大孔树脂柱，先用1-3倍柱体积的水洗脱，再用3-5倍柱体积的50-70％的乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩至干，得藤梨根提取物。

藤梨根提取物(总黄酮含量大于50％)和药用辅料一起制成颗粒剂、片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂或口服液等制剂。

大孔树脂可以是苯乙烯骨架或其他类型，如D101、D201、D301、DM301、AB-8、HP系列、ADS系列等。用大孔树脂吸附有效部位，再用50-70％的乙醇从大孔树脂上洗脱，乙醇的浓度以60％较好，洗脱液回收乙醇并浓缩，经减压干燥或喷雾干燥成，得提取物。

本发明和现有技术相比具有如下优点：本发明提供的纯化方法操作简便、快捷，用乙醇进行洗脱廉价、无毒，纯化物中总黄酮的含量达50％以上，且提取物具有明显的抗肿瘤作用。

为证实得到的产品具有显著疗效的效果，我们进行了一系列药效学实验：现以本发明颗粒剂对人胃癌SGC-7901细胞的影响为例，说明本发明的主要药效作用如下：

一、对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。

方法：取对数生长期SGC-7901 1×10⁵培养于50ml培养瓶中24h，本发明颗粒剂浓度分别为4，8，16mg·ml^-1，康力欣胶囊8μg/ml和空白对照组。共同培养48h，0.25％胰酶消化，PBS冲洗2次，用100μl含钙离子buffer重悬，加5μl Annex V-FITC染料染色20～30min，加5μl PI燃料染色5min，加入适量含钙离子buffer调整细胞浓度到1×10⁵个/ml左右，上流式细胞仪检测。激发波长为488nm，发射波长530nm。

结果：对SGC-7901细胞凋亡的影响：与对照组相比，4～16mg·ml^-1本发明颗粒剂不同程度的促进SGC-7901凋亡，在4mg·ml^-1本发明颗粒剂以促进SGC-7901凋亡为主(32.5％)，在16mg·ml^-1本发明颗粒剂以促进SGC-7901坏死为主(29.9％)。结果见表1

表1对SGC-7901细胞坏死、正常和凋亡的影响

注：与空白对照组比较，^**P＜0.01

二、对人胃癌SGC-7901细胞瘤p53、Bcl-2基因表达的影响