[发明专利]一种橡胶树林段树根离体诱导新生无菌根的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物组织培养方法，具体地说，涉及一种以橡胶树树根作为外植体，通过组织培养诱导无菌根的方法。

背景技术

橡胶树是多年生的异花授粉乔木，在热带地区广泛种植，其主要产品是天然橡胶。天然橡胶是重要工业原料和战略资源，由于我国热带地区土地资源有限，选育和推广高产橡胶树、抗病橡胶树是提高单位面积产量、确保我国天然橡胶总产量逐步提高的关键。

目前生产种植的橡胶树主要是芽接树，是用优良橡胶树品系的芽，接于作为砧木的橡胶树实生苗上，培育成橡胶树芽接苗，芽接苗栽培后即为芽接树。橡胶芽接树减少了橡胶林株间产量的差异，大幅度提高了产量。但是，橡胶树砧木与接穗间存在相互作用，砧木对接穗的影响表现在生长、产量、生理生化特性及组织结构上，从同一母本植株取芽条进行嫁接的芽接树，其接穗的遗传性状是相同的；而作为砧木的实生苗，由种子萌发而来，在有性生殖过程中发生了基因分离，因而实生苗砧木的遗传背景差别很大。芽接树成龄后，普通高产橡胶树之间产量差别小，但超高产橡胶树和普通高产橡胶树之间产量差别则很大，相差几倍到十几倍，这与砧木的遗传性状有关。如近年来发现一些具有优良性状的砧木，对芽接树的产量、抗寒性、速生、抗病性等性状有重要影响。一般在我国大规模种植的高产橡胶树品种如热研7-33-97，单株年产干胶6～7公斤。而目前在云南发现有些品种有超高产的橡胶树，单株年产干胶127公斤，在西双版纳傣族自治州景洪市也有单株年产干胶98公斤的橡胶树。由于确定橡胶树砧木具有优良品性要等到开割以后，从种植到开割需要7～8年的时间，此时在砧木上难以找到芽点或芽眼，优良砧木难以通过常规育种方法扩大繁殖。

利用木本植物的根进行离体培养研究，成功诱导出再生植株也有报道，如1990年Son等用银白杨试管苗的根系切取外植体，经组织培养得到了再生植株；1991年法国的Pedrotti等进行了樱桃的根系离体培养，通过间接愈伤组织诱导和直接芽诱导，成功地培养出植株；1992年Bhat等切取酸柠檬的根在MS培养基中进行组织培养，有低频的植株再生；1996年Sankhla等把合欢种子在无菌条件下诱导萌发，取15～20天龄的幼苗的根作为外植体，经组织培养得到再生植株。

橡胶树是木本植物，利用组织培养技术可快速繁育橡胶树后代，解决橡胶树育种中研究优良性状的砧木的材料问题，能很大地提高橡胶树的经济效益。在科研和生产过程中，迫切需要利用橡胶树优良性状的砧木进行扩大繁殖。申请专利号为200810226001“一种橡胶树试管苗无菌根体细胞胚发生植株再生方法”介绍了选择橡胶树试管苗无菌幼根，在胚性愈伤组织诱导培养基暗培养25～40天，再转入继代培养基暗培养15～30天，然后转移到体细胞胚诱导培养基暗培养20～50天，最后转移到出苗培养基，光照培养20～50天，长成完整植株。该发明是利用橡胶树试管苗无菌根作为培养材料，经体细胞胚发生途径诱导再生植株，建立优良砧木离体培养无性繁殖体系，其技术水平达到国际首创。但是，该发明所用的培养材料是橡胶树试管苗无菌根，无菌根的获取必须先培养橡胶树试管苗。橡胶树试管苗是利用橡胶树花药组织培养诱导植株再生，组织培养须经过初代培养、继代培养和出苗培养。初代培养主要是获取花药和在培养皿内诱导愈伤组织；继代培养主要是将愈伤组织在培养皿内培养成成熟胚状体；出苗培养主要是将胚状体在试管中诱导形成再生植株，即为试管苗。可见，利用橡胶树试管苗无菌根作为培养材料，获取试管苗无菌根难度大，时间长，需花费大量人力和费用，且通过仅能以花器官为外植体来源的橡胶组织培养的取材也较困难。

发明目的

为解决橡胶树试管苗无菌根作为培养材料，获取试管苗无菌根难度大的问题，本发明的目的是利用优良品种橡胶树林段树根为外植体，经组织培养途径，建立橡胶树树根诱导体系，提供大量无菌新根。

发明内容

为了实现本发明目的，本发明所述的一种橡胶树林段树根离体诱导新生无菌根的方法，包括如下步骤：

1)根的选择：选取橡胶树林段的幼嫩树根作为外植体材料，幼嫩树根的直径为1.2～1.5mm；

2)根的处理：将作为外植体材料的幼嫩树根切成长度为8～10mm的根段；

3)无菌根的诱导：将根段外植体，接种于无菌根诱导培养基暗培养，培养温度在24℃～30℃之间，暗培养25～40天，外植体在无菌根诱导培养基中膨大、部分愈伤化、直接诱导出新根。