[发明专利]提供疾患特异性结合分子和靶的方法

权利要求书

1.一种分离疾病相关蛋白特异性结合分子的方法，所述方法包括：

(a)使获自无症状但患有疾病或处于发展疾病的危险的患者、或具有异常稳定的疾病进程的患者的样品经受具有预定临床特征的病理上改变的细胞或组织试样；和

(b)鉴定并任选地分离与所述试样结合、但不与健康对象的对应细胞或组织结合的结合分子。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述样品包括体液或细胞样品，最好其中：

(a)所述体液是脑脊液、血浆或尿液；并且/或者

(b)所述样品包括或来自B细胞或记忆B细胞。

3.如权利要求1或2中所述的方法，其中所述结合分子是抗体。

4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述患者和对象分别为人。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述患者已通过有或没有替代标志物而被确定患有尚未表现的疾病或处于发展疾病的危险，最好其中所述替代标志物选自老年、脑淀粉样蛋白负载，ApoE基因型、APP基因型、PS1基因型、体液中Aβ肽的水平、异前列腺素、Tau和磷酸-Tau。

6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述疾病选自神经疾病、自身免疫病和肿瘤，最好其中所述疾病是阿尔茨海默病。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述样品获自满足以下标准的患者：

(i)年龄为65岁或更大；

(ii)具有完全的认知能力和良好的健康；和

(iii)没有痴呆的临床体征；或

(iv)具有异常缓慢的疾患进展速度，尽管存在可能为阿尔茨海默病的确定的临床诊断。

8.如权利要求1至7任一项所述的方法，其进一步包括以下步骤：

(i)从已鉴定含有与所述试样结合但不与健康对象的对应细胞或组织结合的例如抗体的结合分子的样品中纯化B细胞或B记忆细胞；

(ii)从所述B细胞或B记忆细胞获得所述抗体的免疫球蛋白基因谱系；和

(iii)使用所述谱系表达所述抗体，最好其中步骤(ii)包括以下步骤：

(iv)从所述B细胞或记忆B细胞获得mRNA；

(v)从步骤(iv)的mRNA获得cDNA；和

(vi)使用引物延伸反应从所述cDNA扩增对应于所述抗体的重链(HC)和κ轻链(LC)的片段。

9.一种结合分子，其可通过权利要求1至8任一项所述的方法获得，所述结合分子能选择性地识别疾病相关蛋白的新表位，最好其中所述的结合分子基本不识别以其非疾病相关形式存在的所述蛋白。

10.如权利要求9所述的结合分子，其为抗体或其抗原结合片段，最好其中的抗体为人抗体。

11.如权利要求9或10中所述的结合分子，其中所述疾病为神经疾病，最好其中所述疾病是脑疾病。

12.如权利要求9至11任一项所述的结合分子，其选自单链Fv片段(scFv)、F(ab')片段、F(ab)片段和F(ab')₂片段。

13.一种多核苷酸，其编码权利要求9至12任一项所述的结合分子。

14.一种载体，其包含权利要求13所述的多核苷酸，任选地与编码所述抗体的其他免疫球蛋白链的可变区的权利要求13所述的多核苷酸组合。

15.一种宿主细胞，其包含权利要求13所述的多核苷酸或权利要求14所述的载体。

16.一种用于制备疾病相关蛋白特异性结合分子、抗体或其结合片段或免疫球蛋白链的方法，所述方法包括：

(a)培养权利要求15所述的细胞；和

(b)从所述培养物中分离所述结合分子、抗体或其结合片段或免疫球蛋白链。

17.一种结合分子、抗体、或其免疫球蛋白链或结合片段，其由权利要求13所述的多核苷酸编码，或者可通过权利要求16所述的方法获得。

18.如权利要求9至12或17中任一项所述的结合分子、抗体或结合片段：

(a)其被可检测地标记，最好其中所述可检测标记选自酶、放射性同位素、荧光团和重金属；并且/或者

(b)其与药物相连。

19.一种组合物，其包含：权利要求9至12， 17或18中任一项所述的结合分子、抗体或结合片段，权利要求13所述的多核苷酸，权利要求14所述的载体或权利要求15所述的细胞，其中：

(a)组合物为药物组合物，并且进一步包含药学可接受的载体，还可以进一步包括用于治疗阿尔茨海默病的其他物质，所述其他物质选自小有机分子、抗Abeta抗体及其组合；或者

(b)组合物为诊断组合物，并且进一步包含常规用在基于免疫或核酸的诊断方法中的试剂。