[发明专利]一种金花茶黄酮苷及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于对天然植物中具有药用活性的新成分的制备及应用领域，具体涉及一种金花茶黄酮苷A、其制备方法和用途。 

背景技术

金花茶(Camellia chrysantha(Hu)Tuyama)系山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia Linn.)金花茶组(Section chrysantha Chang)植物，主要分布于广西邕宁县。金花茶不仅有较高的观赏价值，而且具有一定的药用价值和营养价值，是传统的壮族民间用药。金花茶茶叶主要用于咽喉炎、痢疾、肾炎、水肿、尿路感染、黄疸性肝炎、肝硬化腹水、高血压、预防肿瘤等；花主要用于便血、月经不调等。早期对金花茶的研究主要集中在植物形态学、植物分类学方面，近年来对金花茶的抗氧化、降血脂、抗肝癌前病变等活性的研究已见报道，另外对金花茶叶化学成分的研究也有报道。 

发明人在对山茶属植物抗肿瘤活性成分的系列研究中发现，金花茶不同植物部位(花、叶、种子)均具有较强的抑制人白血病细胞株U937细胞增殖的活性。为了阐明金花茶花抗肿瘤活性的物质基础及其作用机理，本发明对金花茶花的化学成分及其诱导肿瘤细胞凋亡的活性进行了研究。 

发明内容

本发明对金花茶花的化学成分进行了分离，从金花茶花95％乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物中分离得到的单体化合物和馏分经定性、定量测定表明主要为黄酮类成分。由此推测，金花茶花中的黄酮类成分可能是其抗肿瘤活性的重要物质基础。因此，本发明通过对金花茶花中黄酮类成分进行分离鉴定，并以诱导肿瘤细胞凋亡为活性指标，从中寻找和筛选新型抗肿瘤药物。因此，本发明从金花茶花中寻找具有抗肿瘤活性的单体成分——金花茶黄酮苷A，其具有如下结构式： 

其在常温下为黄色结晶，熔点为233～235℃。 

本发明的另一目的，是提供一种上述金花茶黄酮苷A的制备方法，其包括如下步骤， 

A.制备金花茶花95％乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物的方法： 

将金花茶花以95％工业乙醇加热回流提取，料液比1g∶2～5ml，温度75～85℃，乙醇提取物浓缩成浸膏后，向浸膏中加入水混悬，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯萃取物； 

B.以硅胶柱色谱分离步骤A所得的乙酸乙酯萃取物，分别以氯仿-甲醇的体积比为100∶1、50∶1、30∶1、20∶1、15∶1、10∶1和5∶1，进行梯度洗脱，将洗脱下来的流分，经硅胶薄层板检识后合并相同流分，收集由氯仿-甲醇10∶1体积比洗脱下的流分备用； 

C.步骤B所得的流分，经ODS反相硅胶柱色谱分离，洗脱液为甲醇∶乙腈∶水的体积比为1∶1∶2，将收集到的各流分经薄层层析铝箔反相硅胶板展开，展开剂是甲醇∶乙腈∶水的体积比为1∶1∶2，流分展开后以显黄色的斑点为主斑点，主斑点R_f值为0.67的流分合并、备用； 

D.步骤C所获得的流分经Sephadex LH-20柱色谱分离，以甲醇洗脱，将收集到的各流分经薄层层析铝箔反相硅胶板展开，展开剂是甲醇∶乙腈∶水的体积比为1∶1∶2，流分展开后以斑点R_f值为0.67的单一流分为终产品。 

具体的，在上述方法中，其步骤A中，向浸膏中加入2～5倍质量的水混悬，并用2倍量乙酸乙酯萃取。 

具体的，在上述方法中，其步骤A中，所述料液比为1g∶3ml。 

具体的，在上述方法中，其步骤A中，所述所述温度为80℃。 

具体的，在上述方法中，其步骤A中，所述加热回流提取的次数为3次，每次2小时。 

本发明的另一方面在于，上述的金花茶黄酮苷A在制备抗肿瘤药物上的用途。 

上述的用途，具体的，是通过将有效剂量的金花茶黄酮苷A作为有效成分与药用辅料混合并制成适当剂型的药物。 

本发明中的实施例里公布了，通过结构式和系统命名在SciFinder Scholar数据库查询，证明所得的上述金花茶黄酮苷A具有新颖的结构，是新化合物。 

实施例中对上述金花茶黄酮苷A的活性进行了检测：用不同浓度的金花茶黄酮苷A干预人白血病U937细胞，采用流式细胞仪检测其对细胞凋亡的影响。 

经考察发现，金花茶黄酮苷A能够抑制U937细胞增殖，采用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞早期凋亡率结果表明，经金花茶黄酮苷A处理后，U937细胞早期凋亡率显著升高。 

附图说明

图1.金花茶黄酮苷A对U937细胞存活率的影响：