[发明专利]一种蛋清抗氧化肽及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种蛋清抗氧化肽及其制备方法。

背景技术

中国是世界上最大蛋品生产和消费国，2005年全国城镇居民家庭年消费鲜鸡蛋11.14公斤/人，大大超过世界平均水平。鸡蛋不仅营养丰富，且含大量具抗菌、抗病毒、抗癌症、调节免疫等多种生理活性物质。如溶菌酶、抗生物素蛋白、卵铁传递蛋白、特异性免疫球蛋白(IgY)和卵磷脂等备受关注，对人类健康起着非常重要的作用。有些已产业化并在医学、营养保健和功能食品等方面具有广泛的应用前景。

随着禽蛋产量大幅度增长，蛋品加工深度与技术含量不断提高。到目前为止，主要有三种蛋清深加工方法，即传统理化加工法、微生物发酵法以及蛋白酶体外酶解法。鸡蛋清经蛋白酶适宜酶解后，除可在一定程度上改善其功能特性和降低过敏原性蛋白的抗原性外，还可产生一些具有特殊生物学活性的小肽。国内外学者关于蛋清蛋白酶解产物抗肿瘤、抗高血压、免疫调节等研究取得显著成果。而对蛋清酶解产物抗氧化性的研究相对较少，更缺乏系统性。

发明内容

本发明以蛋清粉为原料，采用现代生物技术，以鸡蛋清蛋白为原料，研究鸡蛋清酶解产物的抗氧化性，采用超滤、离子交换和凝胶过滤等分离手段分离制备出了具抗氧化活性的生物活性肽-蛋清抗氧化肽，并对其抗氧化活性进行综合评价。

本发明的一方面在于，蛋清抗氧化肽的制备方法的技术方案包括如下步骤：

①蛋清酶解液制备

将蛋清粉溶于磷酸盐缓冲液中配制成蛋清液，蛋清液热变性后冷却；再按10000U/g蛋白的比例向上述蛋清液中加入碱性蛋白酶，并用磷酸盐缓冲液稀释上述蛋清液浓度至8～12mg/mL，置于45～55℃反应4～6h；再于沸水浴中灭酶，离心取上清液，即为蛋清酶解液；

其中，上述磷酸盐缓冲液为0.05mol/L、pH8.0；

②超滤

超滤分离步骤①获得的蛋清酶解液，收集分子量＜3k Da的组分，浓缩；

③DEAE-52离子柱层析

由步骤②获得的产物，经DEAE-52离子柱层析，依次以0.00、0.02、0.05、0.10、0.20mol/L NaCl溶液进行梯度洗脱，根据280nm处的吸光值图谱，分别收集洗脱下来的各蛋白峰对应的组分，收集以0.02mol/L NaCl溶液作为洗脱液的蛋白峰，浓缩；

④Sephadex G-25凝胶柱层析

步骤③所得的产物，经Sephadex G-25凝胶柱层析，洗脱液为蒸馏水，根据280nm处的吸光值图谱，分别收集洗脱下来的各蛋白峰对应的组分，其中平均分子量为273Da的蛋白峰为蛋清抗氧化肽。

具体的，在上述的制备方法中，步骤①所述的蛋清液，是由蛋清粉溶于0.05mol/L、pH8.0磷酸盐缓冲液中配制成浓度为80～150mg/mL。

具体的，在上述的制备方法中，步骤①所述的热变性的条件为，于80～90℃变性25～35min。

具体的，在上述的制备方法中，步骤①所述的沸水灭酶的时间为5～15min。

具体的，在上述的制备方法中，步骤①所述的离心条件为3500～4500r/min离心10～20min。

具体的，在上述的制备方法中，步骤①所述的冷却温度为45～55℃。

具体的，在上述的制备方法中，步骤②所述的超滤为：在0.3MPa条件下，用分子量为3kDa超滤膜超滤。

具体的，在上述的制备方法中，步骤②所述的浓缩为：真空浓缩至浓度为8～12mg/mL。

具体的，在上述的制备方法中，步骤③所述的浓缩为：真空浓缩至浓度为3～6mg/mL。

本发明的另外一方面在于，利用上述的制备方法制备得到的蛋清抗氧化肽。

本发明突出效果为：采用酶解、超滤、离子交换和凝胶过滤等生物技术手段，制备高活性的蛋清抗氧化肽，工艺技术路线合理。将蛋清粉水解为多肽物质，研究其抗氧化性，并经过超滤、离子交换和凝胶过滤分离手段得到较纯的具抗氧化活性的多肽，同时降低蛋白的抗原性，改善其功能特性，而且更利于吸收。该产品还可抑制和清除自由基，调整和改善生理功能，可应用于研制预防和治疗慢性疾病药物。为提高蛋清蛋白附加值、鸡蛋深加工及应用开辟新途径，市场前景广阔。

附图说明

图1DEAE-52离子交换层析分离HEW-2洗脱图谱；

图2DEAE-52分离各组分的超氧阴离子清除能力；

图3Sephadex G-25凝胶色谱分离HEW-2-2洗脱图谱；