[发明专利]棘白菌素产生菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程的技术领域，具体的说，是棘白菌素B产生菌株及其应用。

背景技术

在过去的二十多年时间里严重危害人类生命健康的真菌感染，无论是在死亡率以及感染的种类方面都在不断的增加，特别是在免疫抑制病人中。目前用于治疗临床深部真菌感染的主要药物是唑类抗真菌药物和两性霉素B。

虽然这两类药物对控制临床深部真菌感染起到了重要的作用，但由于这些药物具有以下三方面的不足，使深部真菌感染疾病的死亡率居高不下：

一是由于这两类药物的作用靶点都是真菌细胞膜，其选择性差而导致产生较大的毒副作用；

二是由于临床耐药真菌的广泛出现而使这些药物疗效降低；

三是这些药物对诸如曲霉和白念珠菌等真菌的敏感性不强，致使临床上难以控制这类真菌感染的疾病。

芬净类(棘白菌素类)抗生素是20世纪70年代发现的一组天然产物，具有相同的环状多肽核心和不同的脂肪酸侧链的结构特征，能够非竞争性地抑制真菌细胞壁β-1，3-葡聚糖合成酶的活性。其独特的作用机制，不仅毒副作用低，且对一些唑类和两性霉素B耐药的真菌具有很强的抗菌活性，尤其是对诸如曲霉和白念珠菌等呈现上升趋势的真菌具有独特的疗效，是目前临床治疗深部真菌感染的“王牌抗生素”。因此，国外大制药公司经过30多年的研究开发，已经成功地上市了三个芬净类抗真菌药物，即卡帕芬净、米卡芬净和阿尼芬净。

阿尼芬净(Anidulafungin)是第三代棘白菌素类的半合成抗真菌药物，由美国的Vicuron制药公司研发，后被辉瑞公司收购。与传统的作用于真菌浆膜中麦角固醇的抗真菌药不同，阿尼芬净是一种1，3-β-D-葡聚糖合成抑制剂。1，3-β-D-葡聚糖是真菌细胞壁的重要组成部分，阿尼芬净通过抑制真菌1，3-β-D-葡聚糖合成酶，使真菌细胞壁中1，3-β-D-葡聚糖含量减少，造成细胞壁的完整性被破坏，细胞内渗透压不稳定，最终导致真菌细胞溶解死亡。由于哺乳动物细胞没有细胞壁，缺乏1，3-β-D-葡聚糖合成酶，故阿尼芬净对真菌具有较高的特异性，一般不会产生类似两性霉素B那样的细胞毒性，并与现有的抗真菌剂之间不存在交叉耐药性。

阿尼芬净通过对棘白菌素B(Echinocandin B)进行侧链改造获得。对棘白菌素B的侧链进行酶解，然后连接新的侧链。棘白菌素B可由Aspergillus rugulovalvus(异称Aspergillus rugulosus)发酵产生。由于棘白菌素B的发酵产量很低，进而影响了阿尼芬净的产量。因此，本领域迫切需要一种棘白菌素B产量高、遗传性状稳定的高产菌株。

发明内容

本申请的发明人以Aspergillus rugulovalvus ATCC 58398为出发菌株，经随机诱变后筛选到一株棘白菌素B产生菌株，并将其进行了保藏，保藏号为CGMCC No.5413。

因此，本发明的第一个目的在于，提供一种Aspergillus rugulovalvus，其保藏号为CGMCC No.5413。

本发明的第二个目的在于，提供所述Aspergillus rugulovalvus CGMCCNo.5413用于生产棘白菌素B的应用。

本发明的第三个目的在于，提供一种棘白菌素B的生产方法。

本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现：

作为本发明的第一方面，一种棘白菌素B产生菌株为Aspergillus rugulovalvus ATCC 58398菌株的突变菌株，该菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCC No.5413，保藏日期2011年10月28日。

作为本发明的第二方面，所述的菌株用于生产棘白菌素B的应用。

作为本发明的第三方面，一种棘白菌素B的生产方法，其特征在于，通过发酵权利要求1所述的Aspergillus rugulovalvus CGMCC No.5413获得棘白菌素B。

所述发酵的条件如下：

发酵培养基(wt)：麦芽糖6.0％，糊精2.0％，棉籽粉3.0％，酵母粉1.5％，油0.2％，谷氨酸0.3％，KH₂PO₄0.1％；

发酵液培养温度25℃，培养7天；摇瓶转速220rpm/min。

经过发酵获得的发酵液中棘白菌素B的含量达到800mg/l左右。