[发明专利]海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学、基因工程领域，具体的说是一种海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子及其应用。

背景技术

近年来，我国浅海贝养殖有了长足发展，但随着气候变暖，夏季高温成为制约水产养殖业发展的主要环境因素。生物体受到热激胁迫(高于正常生长温度5℃以上的温度)时，能迅速诱导热休克蛋白的合成，它最早是Ritossa于1962年在果蝇中首先发现的。而且除温度外，许多损伤因素、应激刺激(如缺氧、重金属离子、病毒感染、自由基等)都可以诱导热激反应，合成的热休克蛋白(HSPs)在细胞稳态的重建中起重要作用。热休克蛋白70(HSP70)家族是热休克蛋白超家族的重要成员，除了具有分子伴侣的功能以外，在消除重金属污染对机体造成的损伤，调节受体数量，调理细胞凋亡，促进抗原提呈，参与机体的免疫反应等方面都具有重要的作用。

真核启动子作为在真核细胞中启动基因转录的必需元件，是真核表达载体中一个关键组成部分，决定了目标基因的表达效果，不同类型启动子活性不同。启动子按其作用方式和功能可分为三类：组成型启动子、诱导型启动子、组织特异型启动子。其中，诱导型启动子可根据需要在生物体特定的发育阶段、组织器官或生长环境下，快速诱导基因转录，如热诱导表达基因启动子(HSP启动子)等。目前已有许多热诱导型启动子被成功应用于植物基因工程领域，例如将大豆热激蛋白GmHSP17.3B启动子与gus融合，转入苔藓。通过控制热激温度来调节GUS的表达量；将向日葵的HaHSP17.7G4基因的启动子与gus连接，转化烟草，发现其对高温(42℃)、脱落酸都有应答，在胚胎形成过程中也有积累。在水生动物中，目前还没有热诱导型启动子的相关研究。

发明内容

本发明目的在于提供一种海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子及其应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子，海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子核苷酸序列为序列表SEQ ID NO.1所示。

海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子核苷酸序列为序列表SEQ ID NO.1所示序列具有＞75％同源性，且能够控制下游基因转录的DNA分子。

海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子核苷酸序列为序列表SEQ ID NO.1所示序列的片段、遗传变体或缺失体，且能够控制下游基因转录的DNA分子。

海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子的应用，所述海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子在调控海湾扇贝基因表达中的应用。所述基因为下游基因。

本发明所述含有海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子的重组载体，包含有本发明所述的海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子，以及由该启动子控制的目标蛋白基因。

本发明所述含有海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子重组载体的宿主细胞，是通过在宿主细胞中转染含有海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子的重组载体获得的，重组的宿主细胞中含有本发明所述的含有海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子的重组载体，并能够表达由海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子控制的目标蛋白基因。本发明所述宿主细胞包括且不仅限于Hela细胞。

本发明的突出优点如下：本发明克隆的海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子是典型的热诱导型启动子，具有强启动子活性。实验结果表明，海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子可以在Hela细胞系中高效启动下游基因表达，可以广泛用于基因工程重组载体的构建。

附图说明

图1为本发明实施例提供的RT-PCR检测热胁迫后海湾扇贝热休克蛋白70表达情况柱状图(其中柱状图上方星号标记表示与b l ank组显著差异(**：P＜0.01，N＝5))。

图2为本发明实施例提供的海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子活性分析图(其中将包含有海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子的重组载体转染到Hela细胞系中，检测热激前后由海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子驱动的荧光素酶活性变化。pGL 3-control为阳性对照，pGL 3-basic为阴性对照。)。

具体实施方式

本发明所述海湾扇贝热休克蛋白70基因启动子，是具有下述任一特征的DNA分子：

1、由SEQ ID NO.1碱基对1-1540定义的DNA分子；

2、由SEQ ID NO.1碱基对1-1540定义的序列具有＞75％同源性，且能够控制下游基因转录的DNA分子；

3、是SEQ ID NO.1的片段、遗传变体或缺失体，且能够控制下游基因转录的DNA分子。