[发明专利]免疫诱导生物技术制备广谱抗菌素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗菌素的制备方法，特别涉及一种免疫诱导生物技术制备广谱抗菌素的方法。 

背景技术

抗菌肽(antibacterial peptides)又称肽抗生素(peptide antibiotics)或抗微生物(antimicrobialpeptide)，是生物免疫系统产生的一类抵抗外界生物感染源的活性多肽，在昆虫、植物、动物及人体内广泛存在。它除有非特异性的抗细菌、真菌、病毒、抗感染、抗疾病的作用外，还有抗细胞变异、抗肿瘤细胞的作用，且不损害人体正常细胞，尤其对多重耐药菌株仍有效。抗菌肽对革兰氏阳性和阴性细菌约40余种、绿脓杆菌和副伤寒菌等耐药性菌株均有较强的杀灭作用。抗菌肽是当今生物药物研发的重点和热点。

已有学者对由青枯病病原菌引起的番茄和辣椒青枯病(Bacterial Wilt)、由枯萎镰刀菌引起的香蕉枯萎病(Fusarium wilt)等世界性细菌毁灭性土传病害进行了研究、试验，证明利用抗菌肽，通过拌土、施灌、植株浸根、拌种等方法可对以上病害进行有效地防治，尤其在我国两广和福建等温暖潮湿的环境中，发病率可减少80%以上。通过生物抗菌肽的广泛应用，可有效地防止、减轻农业病虫害，减少农药的施用量，降低农业生产投入，确保农产品食用安全，实现农业增产增收，从而起到事半功倍、绿色环保的作用。

相关研究证明：家蚕具有超强的免疫蛋白合成能力，一条蚕，在不到一个月的生长期中，利用22~25g的桑叶可合成并分泌0.5~1.5g的丝蛋白。现已有家蚕抗菌肽的相关研究，如中国专利ZL200910116463.3公开了一种诱导家蚕产生抗菌肽的方法，所述该方法是采用病毒或细菌注射，或者可以采用使家蚕饥饿的方法；采用病毒或细菌注射时，给家蚕注射微量的细菌或病毒，采用使家蚕饥饿的方法时，对家蚕不喂桑叶，让其饥饿48小时，再正常饲养24小时，该专利所述诱导方法简单易行，能有效诱导出较多的抗菌肽，使抗菌肽提取效率大为提高；中国专利ZL200910193620.0则公开了一种家蚕抗菌肽BmcecE及其cDNA序列与应用，该发明的家蚕抗菌肽对革兰氏阳性菌(苏云金芽孢杆菌)、以及革兰氏阴性菌(大肠杆菌、绿脓杆菌、灵菌败血病菌或青枯菌)均具有抗菌活性、抗菌谱广，家蚕抗菌肽BmcecE可用于人、畜、禽的药物研发、预防和治疗由苏云金芽孢杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、灵菌败血病菌或青枯菌感染引起人、畜、禽的致病，还可以用于生物产品添加剂的制备，防止由苏云金芽孢杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、灵菌败血病菌或青枯菌引起的生物产品的腐败变质。

但目前未见采用免疫诱导生物技术，利用五龄蚕中部丝腺高量合成丝胶蛋白抗菌肽、在后部丝腺合成丝素蛋白抗菌肽，进而通过固相或液相生物技术合成、扩增，制备用于农业抗菌生产的广谱抗菌素。

发明内容

本发明的目的是提供一种免疫诱导生物技术制备广谱抗菌素的方法。

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：一种免疫诱导生物技术制备广谱抗菌素的方法，以天然五龄蚕为原材料，通过天然五龄蚕中部丝腺高量合成丝胶蛋白抗菌肽，在后部丝腺合成丝素蛋白抗菌肽，以生物高活性剂对丝蛋白抗菌基因进行调控，以固相或液相生物技术合成、扩增，制得广谱抗菌素，所述的调控及固相或液相生物技术合成、扩增的具体步骤为：在天然五龄蚕生长到第三天，在天然五龄蚕中部丝腺1/2处合成丝胶蛋白或天然五龄蚕后部丝腺合成丝素蛋白时，进行免疫诱导，然后在免疫高峰期，将天然五龄蚕蚕体经冷冻干燥至水分含量为70%~75%或将天然五龄蚕蚕体直接碾磨粉碎后，投入50kg反应釜中，并加入占天然五龄蚕蚕体质量1/1000的生物高活性剂，在常温下发酵6-8天，冻干后，即得到广谱抗菌素。

本发明所述的免疫诱导生物技术制备广谱抗菌素的方法为下列方法中的一种：

（1）天然五龄蚕生长到第三天，在天然五龄蚕体中部丝腺1/2处合成丝胶蛋白时，用接种器接种枯草杆菌，进行免疫诱导，在免疫高峰期，将天然五龄蚕蚕体冷冻干燥至水分含量为70%~75%，然后将经冷冻干燥的天然五龄蚕蚕体投入50kg反应釜中，并加入占天然五龄蚕蚕体质量1/1000的生物高活性剂，在常温下发酵6-8天，冻干后，即得到广谱抗菌素；

（2）天然五龄蚕生长到第三天，在天然五龄蚕体中部丝腺1/2处合成丝胶蛋白时，用接种器接种枯草杆菌，进行免疫诱导，在免疫高峰期，将天然五龄蚕蚕体直接碾磨粉碎并将粉碎后得到的液体投入50kg反应釜中，加入占天然五龄蚕蚕体质量1/1000的生物高活性剂，在常温下发酵6-8天，冻干后，即得到广谱抗菌素；