[发明专利]HLA-A24限制性结核分支杆菌特异性CTL细胞表位肽的应用

说明书

技术领域

本发明涉及结核病多肽治疗及检测，尤其涉及HLA-A24限制性结核分支杆菌特异性CTL细胞表位肽的应用。

背景技术

CD8T细胞是机体抵抗侵入胞内病原微生物的重要防线。通过细胞表面表达的T细胞受体识别抗原体多肽与感染细胞主要组织相容性分子复合体，从而识别并清除感染细胞。使用抗CD8抗体去除CD8T细胞，可导致机体对结核的易感染性显著提高，结核菌数大量增多，表明CD8T细胞在控制结核感染中重要作用。鉴于CD8T细胞的重要作用，刺激机体产生抗感染特异性CD8T细胞的策略，成为结核疫苗的重要策略之一。

这种策略的前提是鉴定出病原体蛋白中与主要组织相容性复合物I类分子结合的多肽：提呈至细胞表面、与T细胞表面受体结合、刺激T细胞增殖活化的抗原肽，即T细胞表位。上百种不同的MHC分子，使得T细胞表位的技术复杂化，同时有上百种不同的MHC分子，使得T细胞表位的发现与鉴定成为开发重大传染病疫苗的瓶颈，尤其与中国人广泛存在的白细胞抗原I类分子相符的T细胞抗原，寥寥无几。以中国人高发的HBV为例，目前仅鉴定出44个T细胞表位，且绝大多数为HLA-A2限制的T细胞表位。

结核菌几种重要的保护性抗原有：由RD区基因编码的结核分支杆菌早期分泌性抗原性靶ESAT-6、结核杆菌培养滤液蛋白CFP-10及Ag85蛋白等。ESAT-6家族主要包括ESAT-6，CFP-10和TB10.4，相对分子质量(Mr)约为6-10kDa。ESAT-6是一种存在于结核杆菌早期培养滤液(STCF)中的低Mr蛋白，它的基因由RD1区编码，基因全长288bp，编码95个氨基酸。ESAT-6仅存在于致病性分枝杆菌中，包括人型结核杆菌、牛型结核杆菌、非洲分枝杆菌及某些非典型分枝杆菌(如堪萨斯分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌和海水分枝杆菌)，而不存在于卡介苗(BCG)及其它非致病性分枝杆菌中。ESAT-6蛋白有多个T、B细胞表位，能被不同遗传背景的实验动物识别。CFP-10位于ESAT-6上游，研究发现两者可能以复合体形式发挥作用。Ag85是MTB培养早期滤液中的一种分泌蛋白，具有分枝菌酸转移酶的活性，可与细胞表面纤连蛋白(fibronectin，FN)结合，是MTB的FN受体，在分枝杆菌粘附细胞的过程中起重要作用。

很多研究将结核菌重要的保护性抗原，尤其是ESAT-6应用于结核的诊断中，虽然取得满意的结果，但还是存在局限性，主要是蛋白上存在其它致病性分枝杆菌的抗原位点影响其特异性。另外，有研究认为，选择多肽位点而不用全长蛋白或重叠多肽进行诊断可以有效区分活动性结核感染及潜伏性感染。

近年来，国外在结核分支杆菌主要保护性抗原上已经陆续鉴定出一些T细胞表位。ESAT-6上有两个CD8+T细胞表位，位于第82～90位氨基酸和第69～76位氨基酸。CFP10的71-85位氨基酸片段至少包含两段CD8+T细胞表位，一段为HLA-A02识别，另一段为HLA-B35所识别。另有研究发现CFP10的85-94位氨基酸片段为HLA-B14限制性，CFP10的2-11位氨基酸片段为HLA-B44限制性。中国人群的HLA基因型与国外人群有显著差异，虽然A2也占到首位，但HLA-A24、A30、A11是中国人群特异性白细胞抗原。HLA-A24是世界上分布最广的人白细胞抗原之一，特别是在亚洲人群中。然而，结核感染中HLA-A24特异性CD8细胞表位的鉴定还非常少。中国人群T细胞抗原表位的鉴定与筛选，已成为开发结核疫苗的瓶颈。

保护性T细胞表位的筛选和评价体系可用于急需解决的重大传染病发病转归机制、免疫保护机制、新型预防和治疗疫苗的研发、以及疫苗效果的评价。从结核杆菌的保护性抗原中筛选及鉴定一段(或几段)特异的表位，使其能被特异性MHC-I类分子识别，不仅在研究宿主抗结核的免疫学机制，而且在结核病的诊断和疫苗研制中都有着重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种能刺激γ-干扰素分泌的HLA-A24限制性结核分支杆菌特异性CTL细胞表位肽在制备诊断或检测HLA-A24阳性结核病人的药物或在制备治疗结核病的疫苗的应用。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种HLA-A24限制性结核分支杆菌特异性CTL细胞表位肽在制备诊断或检测结核病的药物中的应用，其中所述肽的氨基酸序列选自SEQ IDNO：1-9所示的任一氨基酸序列。

进一步地，所述肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。