[发明专利]一种调控HLA-G表达的miRNA及其应用

说明书

技术领域

本发明属于人类白细胞相关抗原G(HLA-G)技术领域，涉及一种调控HLA-G表达的miRNA及其应用。

背景技术

人类白细胞抗原G是人类主要组织相容性复合物(MHC)，属非经典HLA-I类抗原，共有7种异构体，以膜结合型(HLA-G1、G2、G3、G4)和可溶型(HLA-G5、G6、G7)两种形式存在，主要在人的母胎界面绒毛膜外滋养细胞上表达。HLA-G蛋白的这种独特分布及在母胎免疫中的重要作用逐渐引起了人们的高度重视。关于HLA-G蛋白的研究已成为生殖免疫领域的一个研究热点。

(1)HLA-G在妊娠早期的生物学功能

在妊娠过程中，从胚胎着床开始，胚胎与母体开始了真正意义上的“亲密接触”，进而启动粘附、迁移、基质降解、侵袭母体血管及新生血管生成等信号级联反应，生理性侵袭子宫内膜并增殖分化形成胎儿及其附属物。HLA-G特异性表达于母胎界面，在母体与胎儿的“对话”过程中发挥着重要的免疫和非免疫学功能。

HLA-G在妊娠早期的免疫学功能：母体对属于同种半异体抗原的早期胚胎的免疫耐受是妊娠成功的关键因素。近年来的研究发现，HLA-G在胚胎植入时的生殖免疫学功能主要表现在以下几个方面：a.抑制NK(natural kill，NK)细胞的杀伤活性。在胚胎着床期间，子宫蜕膜有大量浸润的免疫活性细胞，其中80％是NK细胞，HLA-G能抑制NK细胞的杀伤活性，从而在母胎免疫耐受上起重要作用；b.通过调节细胞因子的释放来抑制NK细胞的非特异性免疫反应，进一步抑制NK细胞的杀伤作用；c.抑制T细胞杀伤功能。T细胞占妊娠早期子宫蜕膜淋巴细胞的20％。HLA-G可抑制蜕膜和外周血细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)的细胞杀伤作用，保护胚胎和胎儿免受母体CTL细胞的杀伤；d.诱导T细胞的凋亡。

HLA-G在妊娠早期的非免疫学功能：在妊娠早期胚胎植入后，胚胎的滋养层细胞与内膜接触并迅速增殖分化形成具有侵袭性的滋养细胞，现已证实HLA-G主要表达于母胎界面具有侵袭性的绒毛外滋养层细胞，高表达于早孕至妊娠4～5个月时的胎盘绒毛。在对葡萄胎的研究中还揭示了，HLA-G在葡萄胎的表达高于早孕绒毛，在侵蚀性葡萄胎，滋养细胞具有更强的侵袭力，HLA-G蛋白的表达亦最强，这提示HLA-G的作用并不仅局限于免疫保护，还可能与滋养细胞的侵袭、转移性相关。

(2)HLA-G蛋白特异性表达于母胎界面绒毛膜外滋养层细胞，与反复自然流产的发生密切相关

妊娠是一种特殊而且复杂的生理过程，胎儿对于母体来说是一种半同种异形体，所以母体必须对胚胎产生免疫耐受才能维持妊娠的正常进行，因此，母胎界面NK细胞和T细胞活性的抑制被视为每次成功妊娠的保障。在妊娠早期母胎界面，子宫NK细胞形成了最重要的免疫分子，而且携带着HLA抗原的抑制性受体。HLA-G特异性的分布于母胎界面，在此可以检测到HLA-G蛋白水平的高表达，尽管HLA-C也检测到了高表达，但只是瞬时表达增高。据报道，HLA-G的异常表达与反复自然流产的发生具有密切的联系。体外实验证明，不同来源的高表达HLA-G的细胞，其子宫和外周血中NK细胞毒活性都得到了抑制，这提示我们：母胎界面HLA-G与NK细胞的相互联系，对妊娠结局至关重要。

HLA-G作为细胞表面类型I MHC分子，扮演着抵御母体NK细胞攻击的角色。有研究表明，在HLA缺失的细胞中高表达HLA-G，则会降低对NK细胞介导的细胞降解的敏感性。近期研究(2010年)证实，HLA-G可以直接抑制NK细胞毒活性，而不需要HLA-E分子的间接作用。进一步研究证实，HLA-G通过与NK细胞表面抑制性受体ILT-2、ILT-4的特异性结合，从而抑制NK细胞的细胞降解功能，除此之外，NK细胞受体KID2DL4也被认为与HLA-G特异性结合抑制NK细胞活性。我们知道，ILT-2、ILT-4还可以与其他的HLA-I分子结合，但研究表明，ILT-2、ILT-4与HLA-G的亲和性远远高于其他的HLA-I分子。而且，在HLA-G高表达的细胞系中，特异性添加ILT-2受体的抗体共孵育，细胞降解功能得以恢复。由此可见：HLA-G分子极有可能通过与ILT-2、ILT-4以及KID2DL4受体的特异性结合抑制NK细胞活性，从而影响妊娠结局。

(3)HLA-G特异性表达于母胎界面绒毛膜外滋养层细胞的分子调控机制研究