[发明专利]麦角乙二胺检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物学免疫方法的测定技术领域，特别是涉及一种利用胶体金免疫层析技术制作的一种麦角乙二胺检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

麦角乙二胺(LSD)是已知药力最强的致幻剂，极易为人体吸收。服用后会产生幻视、幻听和幻觉，出现惊惶失措、思想迷乱、疑神疑鬼、焦虑不安、行为失控和完全无助的精神错乱的症状。同时会导致失去方向感、辨别距离和时间的能力，因而导致身体严惩受伤和死亡。

目前有关麦角乙二胺的检测方法有很多，例如：高效液相色谱法(HPLC)、薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)等方法，但是存在需要昂贵的仪器设备，对检测材料的要求高，需要提纯处理等限制。因此研究具有快速、便携等优点的检测方法具有现实意义。本发明介绍了一种以胶体金免疫层析法快速检测麦角乙二胺的检测试剂盒及其制备方法，该方法具有简单、快速，无需任何仪器设备，经济实用等特点，适用于快速定性检测样本中是否含有麦角乙二胺。

发明内容

本发明的目的在于提供一种便携、快速，适合于现场检测麦角乙二胺的检测试剂盒及其制备方法。

一种用于检测麦角乙二胺的检测试剂盒，包括样品垫(1)、胶体金垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、吸样垫(4)和PVC支撑板(5)，在PVC支撑板上依次紧密粘附有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸样垫。所述样品垫为玻璃纤维；所述胶体金垫为胶体金标记的麦角乙二胺单克隆抗体聚酯膜；所述硝酸纤维素膜上依次包被有检测线(T线)和质控线(C线)，其中检测线(T线)上包被了麦角乙二胺-BSA偶联抗原，质控线(C线)上包被了羊抗鼠IgG多克隆抗体；所述吸样垫为吸水纸。

本发明采用纳米胶体金技术及抗原抗体特异性反应，应用免疫竞争抑制反应的原理制备而成，通过待检样本中含有的麦角乙二胺与硝酸纤维素膜上检测线(T线)包被的麦角乙二胺-BSA偶联抗原竞争结合胶体金标记的麦角乙二胺单克隆抗体，通过T线的显色来判定待检样本中是否含有麦角乙二胺。

本发明提供了一种麦角乙二胺检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备麦角乙二胺偶联抗原

将麦角乙二胺与BSA偶联，合成麦角乙二胺-BSA偶联抗原，作为麦角乙二胺偶联抗原。

(2)制备麦角乙二胺单克隆抗体

采用麦角乙二胺-BSA偶联抗原为免疫原免疫BALB/C小鼠，通过杂交瘤技术，得到分泌抗麦角乙二胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株；以体内诱生腹水法大量制备抗体，使用Protein G柱进行纯化，获得麦角乙二胺单克隆抗体。

(3)制备胶体金

取90ml纯化水于洁净的圆底烧瓶中，于电磁加热套中搅拌并加热，等待沸腾后，加入4ml 1％的氯化金溶液，继续搅拌1min，迅速加入6ml 1％的柠檬酸三钠，溶液颜色由浅黄变成黑色最后变成酒红色，继续加热5min，取出冷却到室温，常温避光保存。这样制成的胶体金颗粒的大小为20-40nm。

(4)制备胶体金垫

取颗粒大小为20-40nm的胶体金溶液，用0.1mol/L K₂CO₃将胶体金溶液的pH值调至7.0-9.0，室温放置10分钟；在上述溶液中加入麦角乙二胺单克隆抗体，使麦角乙二胺单克隆抗体的浓度为20-80μg/ml胶体金，混合均匀后，室温放置30分钟；加入10％的BSA溶液使其浓度为10-60μl/ml，混合均匀，室温放置10分钟；12000转离心30分钟，仔细吸取上清液，弃去，剩余的沉淀用初始胶体金体积的胶体金复溶液溶解；12000转离心30分钟，仔细吸取上清液，弃去，剩余的沉淀用30％-100％初始胶体金体积的胶体金复溶液溶解，得到麦角乙二胺单克隆抗体-胶体金标记物；将麦角乙二胺单克隆抗体-胶体金标记物按1mL铺40-70cm²聚酯膜的比例均匀铺在聚酯膜上，再置干燥间，在温度38℃，湿度小于30％的条件下干燥24±2小时，制成胶体金垫。

上述胶体金复溶液为含0.01-0.1％的Tris，1.0-3.0％的蔗糖、0.1-1.0％的BSA的0.02M pH 7.0-9.0的磷酸盐缓冲溶液。

(4)包被麦角乙二胺-BSA偶联抗原、羊抗鼠IgG多克隆抗体