[发明专利]一种高纯度EM原种的制备方法

权利要求书

1.一种高纯度EM原种的制备方法，其特征包括：液体培养基的优化制备、选择应用培养容器、液体培养基高温高压灭菌、菌种的选择、无菌环境下接种、EM原种的培养方法及过程、EM原种的贮存办法。

2.根据权利要求1中所述的一种高纯度EM原种的制备方法，其特征是液体培养基的各种原料配比如下：

(1)红砂糖：200克。

(2)糯米粉：100克。

(3)酵母浸膏：50克。

(4)蛋白胨：20克。

(5)磷酸二氢钾：15克。

(6)硫酸镁：7克。

(7)微生素C(D-异抗坏血酸)：5克。

(8)水：5公斤。

3.根据权利要求1中所述的一种高纯度EM原种的制备方法，其特征是液体培养基的配制方法如下：

(1)稀释糯米粉：用0.5公斤冷水将糯米粉进行稀释。

(2)稀释酵母粉：用0.25公斤50～60℃热水将酵母粉进行稀释。

(3)稀释蛋白胨：用0.25公斤50～60℃的热水将蛋白胨进行稀释。

(4)组料：把余下的4公斤水加热至水温达到50～60℃后依次加入红砂糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、酵母粉稀释液、蛋白胨稀释液；再将溶液加热至沸腾后加入糯米粉稀释液，接着继续将溶液加热至沸腾并持续2～3分钟即得液体培养基。

(5)装瓶：将液体培养基装入培养容器，并封好口。

4.根据权利要求1中所述的一种高纯度EM原种的制备方法，其特征是培养容器选用耐高温高压的白色塑料桶、玻璃瓶等非金属容器。

5.根据权利要求1中所述的一种高纯度EM原种的制备方法，其特征是液体培养基的消毒方法及过程如下：

(1)消毒方法：采用高温高压消毒。

(2)消毒过程：把装有液体培养基的培养容器放到高压锅里，经过1.5公斤/cm²压力、温度为121℃的条件下进行灭菌30分钟。

6.根据权利要求1中所述的一种高纯度EM原种的制备方法，其特征是菌种的选择及用量如下：

(1)菌种选择：选择有效活菌数为≥5×100/ml的高纯度EM原种。

(2)菌种用量：500ml。

7.根据权利要求1中所述的一种高纯度EM原种的制备方法，其特征是接种的方法及过程如下：

(1)接种环境消毒：把经过高温高压消毒的液体培养基及500ml EM原种移至接种室(箱)内，并对接种室(箱)进行消毒。

(2)接种：在无菌环境下的接种室(箱)内将500ml EM原种接入液体培养基里。

8.根据权利要求1中所述的一种高纯度EM原种的制备方法，其特征是EM原种培养的方法及过程如下：

(1)培养方法：进行厌氧发酵培养。

(2)培养温度：培育环境的温度要控制在20℃以上、38℃以下，温度低于20℃会延长培育时间，温度高于38℃会加速微生物的老化甚至死亡。

(3)培养光照：培养容器放置在光照强度较强的环境，光照强度一天有8个小时以上的2000～3000勒克斯(LX)，却又不可完全暴露在太阳光下培育。

(4)培养时间：在25～30℃的温度环境下培养3～4天，即繁殖成成品。

9.根据权利要求1中所述的一种高纯度EM原种的制备方法，其特征是EM原种的贮存办法如下：

(1)瓶子处理：用于装EM原种的贮存瓶要在高压锅里，经过1.5公斤/cm²压力、温度为121℃的条件下进行灭菌10分钟的消毒处理。

(2)装瓶贮存：在无菌环境下将培养好的菌种按量分装到已经消过毒的贮存瓶，并放置于阴凉处贮存。