[发明专利]一种高效分泌谷氨酰胺转胺酶的变铅青链霉菌及其应用

权利要求书

1.一种高效分泌谷氨酰胺转胺酶的变铅青链霉菌(Streptomyces lividan)，其特征在于细胞内含有高效表达MTG基因的载体pIJ86/tg1，MTG基因如Genebank：EU477523所示。

2.构建权利要求1所述变铅青链霉菌的方法，其特征在于包括如下步骤：通过基因克隆得到菌株吸水链霉菌CCTCC No.M203062谷氨酰胺转胺酶编码基因序列及其上下游序列；将得到的tg1基因克隆到表达载体pIJ86转化变铅青链霉菌TK24原生质体，构建高效分泌谷氨酰胺转胺酶的变铅青链霉菌。

3.应用权利要求1所述变铅青链霉菌发酵生产谷氨酰胺转胺酶的方法，其特征在于步骤如下：将培养好的变铅青链霉菌种子液按8％的接种量接入发酵培养基，培养温度30℃，摇瓶转速200r/min，500mL三角瓶装液量为50mL，培养时间42-72h。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于变铅青链霉菌种子液的制备方法为：接种一铲生长良好的斜面培养物或直接接种孢子悬液至装有100mL种子培养基的500mL三角瓶中培养，摇瓶转速为200r/min，温度30℃，培养时间24h。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于发酵培养基配方为：酵母粉5g/L、甘油30g/L、蛋白胨20g/L、大豆粉15g/L、K₂HPO₄ 4g/L、MgSO₄·7H₂O 2g/L、CaCO₃ 5g/L；pH 7.4，使用前添加阿泊拉霉素至终浓度为50μg/mL。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于种子培养基配方为：酵母粉5g/L、甘油30g/L、蛋白胨20g/L、MgSO4·7H2O 2g/L、K2HPO4 2g/L、KH2PO4 2g/L；pH 7.0，使用前添加阿泊拉霉素至终浓度为50μg/mL。