[发明专利]一种宽叶香蒲根尖诱导愈伤组织并分化成苗的方法

权利要求书

1.一种宽叶香蒲根尖诱导愈伤组织并分化成苗的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)将宽叶香蒲的种子干燥、消毒、发芽生根；

(2)对步骤(1)生根后的根尖诱导愈伤组织并分化成苗：

(2a)从步骤(1)中生根后的苗根上获取2-3mm的根尖，转接到愈伤组织诱导培养基上无光条件下培养9周；所述的愈伤组织诱导培养基是外加2g·L^-1植物凝胶、30g·L^-1蔗糖和2.5～20μM毒莠定的MS培养基；

(2b)将步骤(2a)得到的愈伤组织转接到愈伤组织分化培养基上，在25℃、连续光照、光照强度是30μmol·m^-2·s^-1的条件下分化培养4周；所述的愈伤组织分化培养基为添加了2.5～5mg·L^-1细胞分裂素、0～2.5mg·L^-1激动素、0～0.05mg·L^-1萘乙酸和0～0.05mg·L^-1吲哚乙酸的MS培养基；

(2c)将步骤(2b)分化培养后得到的苗转接到生根培养基上培养4周；所述的生根培养基为添加了2mg·L^-1IBA、2g·L^-1植物凝胶和30g·L^-1蔗糖的1/4MS基本培养基；

(2d)将步骤(2c)生根培养后的苗转移到含有花肥的小花盆中，将苗置于25℃的温室中生长，在第一周的时候苗的上方要覆盖一层塑料薄膜，防止水分的蒸发，温室中的光照强度约为230μmol·m^-2·s^-1，3天浇水一次，培养40天后转移到更大的花盆中，花盆中含有花肥并保持3～5cm深度的水。

2.根据权利要求1所述的宽叶香蒲根尖诱导愈伤组织并分化成苗的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的干燥条件为42℃下干燥24小时。

3.根据权利要求1所述的宽叶香蒲根尖诱导愈伤组织并分化成苗的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的消毒，包括如下步骤：

(1a)将种子用灭过菌的蒸馏水浸泡两次，每次浸泡5min，倒干水；

(1b)步骤(1a)处理后的种子用75％(v/v)的乙醇溶液浸泡90秒，倾去乙醇溶液；

(1c)步骤(1b)处理后的种子加入2.5％(w/w)的次氯酸钠溶液中消毒15分钟，在消毒时不断摇晃，重复一次，倾去次氯酸钠溶液；

(1d)步骤(1c)处理后的种子用无菌水浸泡3次，每次浸泡5分钟，倒掉无菌水。

4.根据权利要求1所述的宽叶香蒲根尖诱导愈伤组织并分化成苗的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的发芽生根，将种子转移到添加了30g L^-1的蔗糖、pH5.8的液体MS培养液中，置于25℃连续光照下2天发芽，然后将发芽的种子转接到生根培养基中生根培养5～7天。

5.根据权利要求4所述的宽叶香蒲根尖诱导愈伤组织并分化成苗的方法，其特征在于，所述的生根培养基为添加了2mg·L^-1IBA、2g·L^-1植物凝胶和30g·L^-1蔗糖的1/4MS基本培养基。

6.根据权利要求4所述的宽叶香蒲根尖诱导愈伤组织并分化成苗的方法，其特征在于，生根后的苗的继代培养条件为将生根后的苗转接到固体MS培养基，培养3-5周。