[发明专利]MDRPA中QacEΔ1基因的检测引物及其检测方法

权利要求书

1.MDRPA中QacEΔ1基因的检测引物，其特征在于，包括：

(A).QacEΔ1基因正向引物：5′-cttccgccgttgtcataatc-3′；

(B).QacEΔ1基因反向引物：5′-atcaagcttttgcccatgaa-3′。

2.一种MDRPA中QacEΔ1基因的检测方法，其特征在于，采用权利要求1所述的MDRPA中QacEΔ1基因的检测引物，具体步骤为：

第一步：取经培养后鉴定为MDRPA阳性的临床样本分离株，高温灭活，提取样本DNA，作为检测样品；取不携带QacEΔ1基因的铜绿假单胞菌菌株，高温灭活，提取样本DNA，作为阴性对照品；人工合成QacEΔ1序列，构建携带QacEΔ1基因的重组质粒为阳性对照品；

第二步：用无菌水配制浓度为5-15umol/L的QacEΔ1基因正向引物溶液，浓度为5-15umol/L的QacEΔ1基因反向引物溶液以及浓度为5-15umol/L的QacEΔ1基因检测探针溶液；QacEΔ1基因正向引物的序列为：5′-cttccgccgttgtcataatc-3′，QacEΔ1基因反向引物的序列为：5′-atcaagcttttgcccatgaa-3′，QacEΔ1基因检测探针的序列为：FAM-tggtcgggactcggc-MGBNFQ；

第三步：在每一个PCR反应孔依次中加入PCR Master Mix 10-15ul和第二步得到的QacEΔ1基因正向引物溶液0.1-1ul、QacEΔ1基因反向引物溶液0.1-1ul、QacEΔ1基因检测探针溶液0.1-1ul，然后在不同的PCR反应孔中分别加入第一步得到的检测样品、阴性对照品及阳性对照品0.1-1ul，用灭菌重蒸馏水补足25ul；在荧光定量PCR仪上进行反应，反应条件为40-60℃保温1-3分钟，80-100℃保温1-3分钟，再运行30-50个循环，每个循环包括在80-100℃保温10-20秒，再在50-70℃保温0.5-1.5分钟；

第四步：用软件SDS2.2进行结果分析，PCR结果呈S形曲线即为携带QacEΔ1基因。