[发明专利]亚洲型舞毒蛾的实时荧光PCR检测方法及检测用引物和探针

权利要求书

1.一种亚洲型舞毒蛾的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)设计引物和探针；

该引物的序列为：

上游引物AS-F：5’-AACTTCAGGATGTCCGAAAAATCA-3’(SEQ ID NO.1)；

下游引物AS-R：5’-ACAGCTTTCCTTCTACTTTTATCTTTACCT-3’(SEQ ID NO.2)；

该探针的序列为：

亚洲型舞毒蛾探针AS-TaqMan：FTTGGTAAAGGATTGGATCCCCTCCTCCP(SEQ ID NO.3)或其互补链；

(2)提取亚洲型舞毒蛾DNA；

(3)采用步骤(1)设计的引物和探针进行实时荧光PCR检测。

2.如权利要求1所述的亚洲型舞毒蛾的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，步骤(2)具体为：取亚洲型舞毒蛾单头虫样放入研钵，加液氮磨成粉末状，用试剂盒提取样品DNA。

3.如权利要求1所述的亚洲型舞毒蛾的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述实时荧光PCR检测的反应体系为25μL，包括2×PremixEx Taq 12.5μL，50×ROX Reference Dye0.5μL，步骤(1)设计的上下游引物AS-F/R各1.0μL，AS-TaqMan探针1.0μL，DNA模板2.0μL，超纯水补至25μL。

4.如权利要求1或3所述的亚洲型舞毒蛾的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述实时荧光PCR检测的反应程序为：预变性95℃30sec；然后95℃5sec，60℃34sec循环40次。

5.一种用于检测亚洲型舞毒蛾的引物，其特征在于，其序列为： 

上游引物AS-F：5’-AACTTCAGGATGTCCGAAAAATCA-3’(SEQ ID NO.1)；

下游引物AS-R：5’-ACAGCTTTCCTTCTACTTTTATCTTTACCT-3’(SEQ ID NO.2)。

6.一种用于检测亚洲型舞毒蛾的探针，其特征在于，其序列为：

AS-TaqMan：FTTGGTAAAGGATTGGATCCCCTCCTCCP(SEQ ID NO.3)或其互补链。