[发明专利]有缺陷的流感病毒颗粒

说明书

本发明涉及流感病毒和针对流感的疫苗接种的领域。

流感病毒(正粘病毒科)是有包膜的具有分段的基因组的负链RNA病毒(Taubenberger和Layne，Molecular Diagnosis Vol.6 No.42001)。根据它们的核蛋白和基质蛋白之间的显著的抗原差异，可以将它们分成2类：一类包含流感A和B，另一类包含流感C。这3个病毒类型也存在致病性和基因组组织的差异。发现类型A广泛存在于恒温动物中，但是类型B和C主要是人病原体。通过从病毒粒子表面伸出的血细胞凝集素(HA)和NA表面糖蛋白的抗原特征，进一步细分流感A病毒。目前，有15种HA和9种NA亚型。流感A病毒能感染广泛种类的动物，包括鸟、猪、马、人和其它哺乳动物。水鸟是所有已知亚型的流感A的自然宿主，且可能是人流行流感株的遗传物质源。

不同于相关的副粘病毒，流感病毒具有分段的RNA基因组。流感A和B病毒具有类似的结构，而流感C是更离散的。A和B类病毒都含有8个离散的分别编码至少一种蛋白的基因片段，C类型含有7个离散的片段，它组合了A和B类型的片段4和6。流感A和B病毒覆盖着3种蛋白的突出部分：HA，NA，和基质2(M2)。流感C病毒仅仅具有一种表面糖蛋白。每种流感RNA片段由核蛋白(NP)包裹成壳，形成核糖核苷酸核蛋白(RNP)复合物。这3种聚合酶蛋白与RNP复合物的一端相连。RNP被膜围绕，所述的膜含有作为组成部分的基质蛋白(基质1)。包膜的磷脂部分源自宿主细胞膜。在病毒颗粒内，还发现了非结构性蛋白2(NS2)。

世界卫生组织(WHO)关于流感病毒命名法的规则如下。首先，指定病毒的类型(A，B，或C)，然后为宿主(如果非人)，分离地，分离数目，和分离的年(以斜线分隔)。对于流感A，在括号中注明了HA和NA亚型。例如，包含在近期的2000至2001季的三价疫苗中的株是：A/巴拿马/2007/99(H3N2)，A/新喀里多尼亚/20/99(H1N1)，和B/Yamanashi/16/98。自1977年以来，已经有2种流感A亚型共存于人类：H1N1和H3N2。

流感病毒能积累复制过程中的点突变，因为它们的RNA聚合酶复合物不具有校对活性。能改变表面糖蛋白的抗原部分中的氨基酸的突变能通过逃避预先存在的免疫而为病毒株提供选择优势。通过结合某些宿主细胞上的受体，HA分子能启动感染。针对HA蛋白的抗体可以阻止受体结合，能非常有效地预防相同株的再次感染。通过抗原性漂移(其中目前循环的HA基因的突变会破坏抗体结合)或抗原性转变(其中病毒获得新亚型的HA)，HA可以逃避以前获得的免疫。抗原性漂移压力在HA分子中是不均等的，阳性选择变化主要发生在HA蛋白的球形头上。这些变化在HA中的积累程度也大于在NA中的。在其它流感蛋白中更慢产生变化。同样地，抗原性漂移压力在人-适应的流感株中最大，在猪-和马-适应的株中中等，在鸟-适应的株中最小。

因为流感病毒具有分段的基因组，2种不同株在同一宿主中的共感染可以导致生成新的重新组合的流感株，其含有亲本基因片段的不同组合。已知15种HA亚型存在于野鸟中，并提供了HA的来源，所述HA对于人类而言是新的。含有新的亚型(通过抗原性转变)的流感株在人循环中的出现，已经成为1957和1968年的最近2次流感大流行的原因，且极有可能是1918年流感大流行的原因。为了与已知的关于流行性流感病毒的出现相一致，流行株必须具有在抗原性上不同于目前流行的HA；该HA不得已经在人类中循环了60至70年；且该病毒必须是可以在人间传播的。在1957和1968年，HA的转变导致了大流行，且在2种情况下，流行株的HA与鸟毒株密切相关。尽管大流行的一个绝对条件是HA必须变化，尚不清楚病毒的其它部分可以或必须变化的程度。仅仅可以得到1957和1968年的流行性病毒用于直接研究，使用分子考古学，表征了1918年的流行性流感病毒。在1957年，3个基因被替换为鸟类基因：HA，NA，和聚合酶复合物的亚基(PB1)。在1968年，仅仅替换了HA和PB1。

通过病毒分离、血凝抑制(HI)实验、免疫测定法检测抗原、血清学实验、验证分泌物中的NA活性或基于分子的实验，可以特异性地诊断流感感染。可以将试样收集为唾液、鼻咽拭子或通过口漱缓冲盐水溶液得到的鼻咽洗液。流感诊断的标准是培养后进行免疫学表征。血清学分析能提供精确的、但是可追溯的流感感染方法，因为它需要收集急性期和渐愈期的血清。