[发明专利]天然芸苔素内酯类似物的应用

权利要求书

1.天然芸苔素内酯类似物的提取方法，其包括，

(1)用80～100％(V/V)乙醇水溶液提取破碎的油菜花粉，固液分离后保留滤液，获得醇溶性提取液；

(2)将醇溶性提取液与0～60％(V/V)乙醇水溶液混合，然后加入乙酸乙酯萃取，保留乙酸乙酯层并加入酯酶和糖化酶进行不完全反应，然后干燥，获得酯溶性提取物；其中，不完全反应是在35～42℃反应0.5～2小时，使酶反应的底物在全部转化前终止反应，由此保持天然芸苔素内酯类似物的多样性；酯酶是提取自细菌的酯酶；并且，糖化酶是提取自真菌的糖化酶；

(3)酯溶性提取物上样于硅胶色谱柱，用甲醇和乙酸乙酯的混和液洗脱，收集含有天然芸苔素内酯类似物的洗脱液，干燥并溶解于甲醇中，获得硅胶柱纯化液；

其中，硅胶色谱柱中的填料是200～300目硅胶；

混和液中甲醇∶乙酸乙酯的体积比为3～8∶0.5～1.5；和/或

干燥是减压干燥；和

(4)将硅胶柱纯化液上样于C18反相色谱柱，用乙腈和水的混和液洗脱，

混和液中乙腈∶水的体积比为60～90∶10～40；和/或

分别收集含有如式BR6、BR4和/或BR5中的至少一种所示的天然芸苔素内酯类似物的洗脱液，如式BR6、BR4和/或BR5中的至少一种所示的天然芸苔素内酯类似物的纯度大于90％：

2.权利要求1所述的提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，滤液进一步浓缩。

3.权利要求1所述的提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，

乙醇水溶液的浓度为85～98％(V/V)；

油菜花粉∶乙醇水溶液的重量体积比为50～200克∶200～500mL；

步骤(1)进一步包括，固液分离后得到的滤渣用80～100％(V/V)乙醇水溶液提取，然后进行固液分离，保留滤液并与步骤(1)中获得的滤液合并；

浓缩是减压干燥浓缩；和/或

醇溶性提取液：步骤(2)中的乙醇水溶液的体积比为0.5～2∶1～3。

4.权利要求3所述的提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，乙醇水溶液的浓度为90～97％(V/V)。

5.权利要求3所述的提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，乙醇水溶液的浓度为93～96％(V/V)。

6.权利要求3所述的提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，乙醇水溶液的浓度为95％(V/V)。

7.权利要求3所述的提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，油菜花粉∶乙醇水溶液的重量体积比为80～150克∶250～450mL。

8.权利要求3所述的提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，油菜花粉∶乙醇水溶液的重量体积比为90～120克∶280～350mL。

9.权利要求3所述的提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，油菜花粉∶乙醇水溶液的重量体积比为100克∶300mL。

10.权利要求3所述的提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，浓缩为以65～80℃和0.08～0.09Mpa的真空度干燥浓缩。

11.权利要求3所述的提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，浓缩为以75℃和0.085Mpa的真空度干燥浓缩。

12.权利要求3所述的提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，醇溶性提取液：步骤(2)中的乙醇水溶液的体积比为0.8～1.5∶1.5～2.5。

13.权利要求3所述的提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，醇溶性提取液：步骤(2)中的乙醇水溶液的体积比为1∶2。