[发明专利]一种用于早期筛查或辅助诊断泌尿系统疾病的检测试剂盒、检测方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于早期筛查或辅助诊断泌尿系统疾病或病理状况的检测试剂盒和检测方法。具体地，本发明涉及针对在健康人群尿液中稳定表达的18种标志物候选蛋白的筛选，以及它们的用途、包含它们作为泌尿系统疾病标志物的检测试剂盒及其检测方法。 

背景技术

通过早期筛查发现或辅助诊断泌尿系统疾病，尤其是泌尿系统恶性疾病如肿瘤等，对预防和根治疾病有重要意义。而尿液来源简单方便无损伤，病人容易接受，无不适感，没有禁忌症。尿液可以反应肾脏的整体情况，可以更及时准确地反应肾脏的生理状态和功能水平。因此尿液是一种理想的用于疾病诊断的生物样品。 

目前临床上通过检测尿液的各项生化指标来反映泌尿系统功能的改变，协助临床诊疗。但这些指标是不能在肾功能的发生显著改变的疾病早期给予提示。这将导致错过治疗泌尿系统恶性疾病的最佳时机。对此，大量的研究集中在尿液中寻找一些疾病相关蛋白标志物，能够早期灵敏地提示某些恶性疾病的发生，并且报道了大量的这样一些蛋白标志物。然而，由于尿液蛋白的来源十分复杂，并且受环境饮食等因素影响，生理波动十分巨大，从而导致了这些疾病相关蛋白标志物由于特异性和稳定性等问题而都没有被临床广泛应用。 

本发明通过对大规模健康人群尿液进行蛋白质组学系统分析，ELISA反复验证，最终寻找到了18个在健康人尿液中稳定表达的蛋白。进一步的研究发现这18个蛋白所组成的表达谱型能够反映泌尿系统的健康状态，如果这18个蛋白所组成的表达谱型明显改变将提示泌尿系统的疾病状态，进而利用这18个尿蛋白研制早期筛查泌尿系统疾病的检测试剂盒将会产 生极大的市场价值。 

发明内容

发明人经过对大规模健康人群尿液进行蛋白质组学系统分析，ELISA反复验证，最终寻找到了18个在健康人尿液中稳定表达的蛋白。进一步的研究发现这18个蛋白所组成的表达谱型能够反映泌尿系统的健康状态，且这18个蛋白所组成的表达谱型明显改变可以提示泌尿系统的疾病状态。发明人通过实验发现，α1-酸性糖蛋白(ORM1)、α2-HS糖蛋白(AHSG)、α1微球蛋白bikunin前体蛋白(AMBP)、锌2-糖蛋白(AZGP1)、组织蛋白酶D(CTSD)、血红素结合蛋白(Hpx)、激肽原1(Kininogen 1，KNG1)、丝氨酸蛋白酶肽酶抑制剂1(SERPING1)、多聚免疫球蛋白受体(PIGR)、前列腺素D合成酶(PTGDS)、UMOD、糖盏蛋白(GC)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)、α1-B糖蛋白(A1BG)、脱氧核糖核酸酶(DNASE1)、Alpha 1胶原蛋白VI(Alpha 1 collagen VI、COL6A1)、酸性Alpha葡萄糖酶(Glucosidase Alpha acid，GaA)和CD14(白细胞分化抗原14)不但在健康人尿液中稳定表达，并且这些蛋白的变化与泌尿系统的疾病密切相关。鉴于以上原因，发明人不仅通过实验验证了上述蛋白作为早期筛查或辅助诊断泌尿系统疾病的可行性，而且利用这些蛋白标志物进一步开发用于泌尿系统疾病早期筛查和诊断的检测试剂盒。 

因此，在第一个方面，本发明提供了一种用于早期筛查或辅助诊断泌尿系统疾病或病理状况的检测试剂盒，其包含一种或多种检测试剂和一种或多种捕捉试剂，所述捕捉试剂能够特异性结合待测样品中可能存在的泌尿系统疾病标志物，所述检测试剂能够检测与所述标志物特异性结合的捕捉试剂，其中所述标志物为选自COL6A1、GC、RBP4、DNASE1、GAA、SERPING1、CTSD、KNG1、UMOD、PIGR、AHSG、A1BG、AMBP、AZGP1、PTGDS、HPX、CD14和ORM1蛋白中的任一种或多种的任意组合。 

在第二个方面，本发明提供了一种检查样品中的泌尿系统疾病标志物的方法(下面简称“本发明的方法”)。 

在本发明的方法的一个实施方案中，所述方法包括以下步骤： 

1)提供分别包含一种或多种检测试剂和一种或多种捕捉试剂的溶液，所述捕捉试剂能够特异性结合样品中的泌尿系统疾病标志物，所述检测试剂能够检测与所述标志物特异性结合的捕捉试剂，其中所述标志物为选自COL6A1、GC、RBP4、DNASE1、GAA、SERPING1、CTSD、KNG1、UMOD、PIGR、AHSG、A1BG、AMBP、AZGP1、PTGDS、HPX、CD14和ORM1蛋白中的任一种或多种的任意组合； 

2)向样品中加入所述捕捉试剂并在适于所述捕捉试剂与所述泌尿系统疾病标志物特异性结合或反应的条件下结合或反应形成第一混合溶液，