[发明专利]一株分泌抗2型猪链球菌的型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于病原微生物免疫学检测技术领域，涉及一株分泌抗2型猪链球菌的型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其制备方法。

背景技术

2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2，SS2)是一种重要的人畜共患病的病原体。根据荚膜多糖的抗原性，SS可分为35个血清型，其中1、2、1/2、7、9、14型具有致病性，以2型(SS2)致病性最强。同为SS2菌株，其致病性又有强、弱和无之分。SS2疫病流行范围很广，在加拿大、美国、丹麦、荷兰等国曾多次发生流行。我国于1991年首次在广东省猪群中发生疫情，20多年来在湖北、湖南、江苏、江西、安徽、四川等南方省份的猪群中经常有此病流行，目前已形成和维持着多处疫源地，在适宜气候和环境条件下存在大规模暴发流行的可能。猪群对此病普遍易感，感染后可有急性败血症、肺炎、脑膜炎、关节炎、心内膜炎及急性死亡等多种临床类型，如不及时治疗病死率可达40％甚至更高；病后幸存的猪生长缓慢，存栏时间大为延长。目前在我国，猪链球菌感染每年造成的直接经济损失达数十亿元。特别值得关注的是，近年来我国发生的两起SS2暴发流行感染猪和人的公共卫生事件：1998年江苏病死猪10万余头，人群感染25例，其中中毒性休克综合征(Streptococcal toxic shock syndrome，STSS)患者16例，死亡13例(81.3％)；2005年四川省30余乡镇养殖的猪场流行该病，死亡猪几千头，人群感染204例，其中STSS型患者38例，死亡37例(97.4％)。同期广东、香港也有病例报导，江苏虽无人感染病例，但猪群流行此病，病死8万余头。与以往国际报导比较，这两次流行有以下特点：国外人感染病例均为散发，我国则呈现群体染病特点；国外病例临床表现为败血症或脑膜脑炎，预后较好，国内这两次流行有高比例的病人出现STSS，病程短，病情凶险，病死率高(81.3％～97.4％)。引起此次疫情的病原是具有荚膜多糖(capsular polysaccharide，CPS)、溶菌酶释放蛋白(muramidase releasedprotein，MRP)、胞外因子(extracellular factor，EF)、溶血素(suilysin，SLY)等毒力蛋白的2型猪链球菌强毒株，但致病机理尚不明确。

单克隆抗体是研究细菌毒力因子的有用工具，国外研究者用抗B群链球菌，脑膜炎奈瑟菌和大肠杆菌荚膜的单抗进行动物保护性实验并能取得较好的效果。单克隆抗体对许多疾病的诊断和治疗都具有十分重要的意义。但细菌的表面抗原很丰富，做出的单抗常常有交叉反应，不能很专业的识别一种细菌。从目前的国内外的研究来看，猪链球菌的单抗也存在这种问题，只有靠预吸附其他链球菌来克服交叉问题。

发明内容

本发明的目的是为了克服上述技术中存在的不能克服交叉反应的缺陷，提供一株抗2型猪链球菌的型特异性单克隆抗体细胞株。

本发明的另一目的是提供该杂交瘤细胞的制备方法。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一株分泌抗2型猪链球菌的型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株2A9，该杂交瘤细胞株通过如下方法制备：

(1)采用灭活的2型猪链球菌菌株O5ZYH33多次免疫雌性BALB/c小鼠，使小鼠体内抗体达到最高峰时分离脾脏B淋巴细胞；

(2)将步骤(1)分离的脾脏B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合；

(3)以甲醛灭活的O5ZYH33全菌抗原包被ELISA板，使用全菌ELISA筛选阳性克隆；再进一步以全菌裂解液为抗原用Western blot法再次验证ELISA筛选得到的阳性克隆，最终获得杂交瘤细胞株2A9。

其中，步骤(1)优选：选用雌性BALB/c小鼠，采用甲醛灭活的O5ZYH33分离株为免疫原，注射菌量为10⁷cfu/只鼠，间隔2周追加免疫共3次，在融合前3天加强免疫一次，菌量为10⁸cfu/只鼠。

一种制备分泌抗2型猪链球菌的型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株的方法，包含如下步骤：

(1)采用灭活的2型猪链球菌菌株O5ZYH33多次免疫雌性BALB/c小鼠，使小鼠体内抗体达到最高峰时分离脾脏B淋巴细胞；

(2)将步骤(1)分离的脾脏B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合；