[发明专利]一种草莓抗连作障碍突变体的筛选方法

权利要求书

1.一种利用草莓枯萎病菌尖孢镰刀菌毒素和自毒物质对羟基苯甲酸混合液作为选择压力诱导筛选抗枯萎病突变体的方法，其特征在于，以草莓组培苗叶段为诱导材料，选用愈伤组织最优再生体系诱导产生不定芽，再将不定芽接种在含半致死剂量混合液的MS继代培养基培养后，转接于较高浓度混合液培养基再继代培养，并对分化和遗传稳定性强的小植株移栽于花盆中，通过接种尖孢镰刀菌孢子悬浮液和浇灌自毒物质对羟基苯甲酸，进一步鉴定植株抗病性、生长发育指标和结实性，从而筛选得到抗性突变体；具体步骤如下：

(1) 剪取组培苗叶段，将其接种于不同碳源、不同浓度TDZ或AgNO₃的MS固体诱导培养基，筛选愈伤组织诱导最优再生体系，得愈伤组织诱导培养基；

(2) 将草莓叶段接种于含有不同浓度尖孢镰刀菌毒素和自毒物质对羟基苯甲酸的愈伤组织诱导培养基中，筛选混合液诱导半致死剂量；

(3) 将草莓叶段接种在混合液半致死剂量愈伤组织诱导培养基上，诱导产生不定芽；将不定芽接种在含半致死剂量混合液的MS培养基上，继代培养5代后；再接种于高浓度混合液培养基上继续继代培养5代，筛选再生植株； 

(4) 将再生植株接种在混合液半致死剂量MS继代培养基上，测定其分化和遗传稳定性；然后将筛选出的再生植株接种于生根培养基中，光照培养60d后移植到花盆中；再用对羟基苯甲酸和病菌孢子悬浮液处理，30d后鉴定突变体发病情况，得抗性突变体。

2.根据权利1所述的方法，其特征在于，以草莓组培苗叶段为诱导材料，愈伤组织最优再生体系为MS固体培养基＋麦芽糖(10~30g/L)+TDZ(1~4mg/L)+ AgNO₃ 1mg/L。

3.根据权利1所述的方法，其特征在于，筛选突变体混合液的半致死浓度为10%毒素＋1.0×10^-4molL^-1对羟基苯甲酸。

4.根据权利1所述的方法，其特征在于，接种在含混合液半致死剂量的MS培养基上的不定芽，继代培养5代后，再于含混合液浓度高一梯度MS培养基上继续继代培养5代，得诱导再生植株。