[发明专利]根据蛋白质-DNA复合物晶体结构设计新型TALE的方法

权利要求书

1.设计特异识别DNA的TALE蛋白的方法，包括以下步骤：

1) 位于组装单元第16、17位的残基采用侧链含有氢键受体基团或碱性的氨基酸;

2）位于组装单元第12位的残基采用侧链含有氢键供体基团;

3) 对于碱基腺嘌呤A，组装单元第13位的残基选自Asn，Asp，Gln，Glu，Ser，Thr;

4) 对于碱基鸟嘌呤G，组装单元第13位的残基选自Asn，Gln，Asp，Glu，His，Lys，Arg，Ser，Thr；

5) 对于碱基胞嘧啶C，组装单元第13位的残基选自Asp，Asn，Glu，Gln, Ser, Thr,Tyr；

6) 对于碱基胸腺嘧啶T，组装单元第13位的残基选自Gly，Ser，Ala；

7) 对于碱基5-甲基胞嘧啶5mC，组装单元第13位的残基选自Gly，Ser，Ala；

其中所述组装单元具有图11所示的序列。

2.权利要求1的方法，其中步骤1）中所述的位于组装单元第16、17位的残基为Arg、Lys、His、Asn、Gln。

3.权利要求1或2的方法，其中步骤2）中所述的位于组装单元第12位的残基为His、Asn、Gln、Ser、Thr、Tyr、Lys、Arg。

4.制备特异识别DNA的TALE蛋白的方法，包括以下步骤：

按照权利要求1的方法设计所述蛋白，和对所述蛋白进行表达。

5.融合蛋白，包含权利要求1至4中任一项所述的TALE蛋白或其DNA结合结构域。

6.权利要求5的融合蛋白，其中所述TALE蛋白或其DNA结合结构域的N端或C端与荧光类蛋白、DNA水解酶或DNA-RNA杂合链核酸酶、或任何靶向基因的转录因子激活结构域融合。

7.权利要求1至4中任一项所述的TALE蛋白或权利要求5或6的融合蛋白在制备用于对细胞生命过程进行干涉的方法的制剂中的用途，其中所述方法包括利用权利要求1至4中任一项所述的TALE蛋白或权利要求5或6的融合蛋白对特定基因表达进行激活或抑制。

8.权利要求1至4中任一项所述的TALE蛋白或权利要求5或6的融合蛋白在制备用于对细胞生命过程进行干涉的方法的制剂中的用途，其中所述方法包括利用权利要求1至4中任一项所述的TALE蛋白或权利要求5或6的融合蛋白对基因组中的特定基因进行敲除、引入定点突变或插入新基因片段。