[发明专利]一种富集弧菌噬菌体与生物防制宿主菌的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种富集弧菌噬菌体与生物防制宿主菌的方法，本发明属于海水水产养殖疾病防控的微生物技术，适用于海产经济动物养殖海区和养殖场。

背景技术

弧菌作为水产养殖中一种常见的条件性致病菌，每年都带来较大的危害。条件致病菌又称为机会致病菌，在某种特定条件下可致病的细菌，称为条件致病菌。在机体内条件致病菌的集聚部位改变、机体抵抗力降低或菌群失调时则可致病。在水体内水质条件恶化，水体条件性致病菌浓度增加，养殖动物免疫功能降低，均可以导致疾病。因此利用弧菌噬菌体降低水体宿主菌体浓度，就成为水产经济动物病害生物防控的新技术。

海水弧菌包括很多种，主要分为5群：副溶血性弧菌，溶藻性弧菌(V.alginolyticus)，伤口弧菌(V.vulnificus)，梅契尼柯夫弧菌(V.Mechnikov)(CDC肠群16)，F群弧菌(CDC EF-6)。这5群嗜盐性弧菌生活于海水和海洋鱼、蟹、贝壳和甲壳类动物中，通常引起胃肠道感染，也可引起肠道外感染。每一种弧菌有多种菌株，而每一菌株对应有噬菌体，噬菌体对非宿主菌株，裂解效率低或没有，不同区域的菌株的噬菌体也不具备相互裂解性。因此对特定地区，特定菌群需要分离特定噬菌体。目前，利用分子生物学手段，噬菌体裂解酶分离手段等并不能为广大的养殖业服务。

在养殖环境中，噬菌体或游离病毒普遍存在，但是各种噬菌体或游离病毒以不同方式混杂存在，我们采集的水样量少，涉及的范围小，增加了分离特定噬菌体的难度。大多数情况是找到宿主而不能分离到噬菌体，能够分离到噬菌体的几率为0.1-2%。从已有的研究可知，海洋滩涂弧菌的噬菌体在动物肠道有大量保留，其次为排污口。暴露的环境，宿主弧菌及其噬菌体易于产生、爆发，并迅速消失，而环境动物体内，如贝类可以长期保留，这为我们分离特定宿主菌的噬菌体奠定了基础。

一个区域，如果长期有一种菌株存在，其噬菌体将逐渐增加数量，但是往往局限于小范围。由弧菌病原菌的流行病学可知，长期的积累，增加了分离到噬菌体的这种机率。本发明设计养殖场所保留宿主菌与噬菌体的专用池，并利用养殖区贝类长期保留宿主，并及时更替保留宿主，控制宿主菌浓度和贝类浓度，减少保留贝类疾病，对于积累宿主菌及其噬菌体有重要意义。进一步分析将提出，保留的宿主菌还是当年当时的病原菌，还是当前产生的宿主菌？由于养殖池和养殖场所保留宿主菌与噬菌体的专用池，其海水和养殖动物来源一致，只是后者随时间变化，有部分更替，所以两者的菌株将有很大程度的一致性。

养殖水体浮游藻类浓度和生长周期，对同一生态系统的菌群种类、数量，通过占据生态位产生重要影响。因此，维护菌群的生存、发展又不能让其繁殖到高浓度，对保留菌株的动物产生病害，就必须有效调节水体藻类的数量、种类以及生长状况。

在动物和人体实验的研究证明，噬菌体进入动物或人体以后在48h或数天内被全部清除，同时噬菌体生物防治认为在感染病原体后必须立即使用相应的噬菌体，延迟使用则无效或低效。必须在“有效时机”或提前用药问题使养殖现场使用噬菌体生物防治的可操作性极差，极大地限制噬菌体的应用。因此保持环境中一些致病弧菌的噬菌体浓度，具有一定意义。