[发明专利]一种检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于农业生产技术领域，具体涉及一种检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法。

背景技术

酚酸是植物典型的根系分泌物质，也是植物最重要的化感物质之一，其对植物生长发育和根系微生态具有重要的修饰限制作用。植物根系分泌物中一般包含5种酚酸：对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、香豆酸和阿魏酸。大量研究表明，根系分泌物中酚酸类物质能抑制其他植物的生长及根系活动，造成一种克生现象，同时酚酸的积累可对作物的连作产生自毒作用从而造成连作障碍。烤烟是典型的忌连作作物，烤烟连作会造成烤烟产质量下降、病虫害加重、土壤环境恶化等不利影响。因此研究烤烟根系分泌物中化感物质特别是酚酸类物质的种类和含量，对深入研究烤烟连作障碍机理和生物防治具有重要意义。

现有根系分泌物酚酸的检测技术主要有高效液相色谱、气相色谱、液-质和气-质联用等，其中高效液相色谱法具有不受试样挥发性和热稳定性限制，应用范围广，可选择流动相较多等特点，较适宜于根系分泌物中有机酸的分析。采用反相色谱法分析根系分泌物酚酸已在水稻、大豆和番茄等作物上得到应用，但分析手段存在差异，主要原因是作物种类不同而导致根系分泌物提取方法和检测手段存在差异。目前，对烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的检测尚未见有成功的报道。因此，制定一种烤烟根系分泌物中酚酸类物质的分析方法对较好开展烤烟根系研究具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种操作简便、准确性高、重现性好的检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现。

一种检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法，包括以下步骤：

1、波长选择：选择280nm作为对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、香豆酸和阿魏酸的检测波长；

2、色谱选择：采用甲醇和乙酸水溶液体系，甲醇浓度为体积百分数30％，乙酸浓度为体积百分数0.2％，进样量为10μL，流速为1.0mL/mim，检测时间30min；

3、标准工作液制作：分别称取对羟基苯甲酸、香草酸、香豆酸、丁香酸、阿魏酸各0.1000g，用5mL甲醇溶解并用超纯水定容至1000mL，制成质量浓度为100μg/mL的酚酸混合储备液，将混合储备液分别稀释5倍、10倍、20倍、40倍和100倍作为标准工作液；

4、对各酚酸标准工作液浓度与其相应峰面积进行回归，并计算线性回归方程、线性范围、回收率、标准偏差、检测限和工作曲线；

5、样品前处理：采用水培法收集根系分泌物，体积为500mL，用二氯甲烷100mL萃取3次，收集有机相并用旋转蒸发仪浓缩至干，超纯水溶解定容至2mL，过0.45μm有机相滤膜，备用；

6、样品测定：采用自动进样器进样，以不同酚酸种类保留时间定性，定量采用峰面积外标法，得到烤烟根系分泌物中酚酸的种类和含量。

步骤(6)中所述的不同酚酸种类保留时间具体为：对羟基苯甲酸，10.839min；香草酸，12.624min；丁香酸，13.688min；香豆酸，24.955min；阿魏酸，28.970min。

同现有技术相比，本发明具有以下优点：

1、本发明填补了烤烟根系分泌物中酚酸物质种类和含量检测空白。烤烟根系分泌物研究尚属起步阶段，目前并无与烤烟根系分泌物质相关的检测技术，本发明首创利用高效液相色谱法对烤烟根系分泌物中酚酸类物质的定性和定量检测，为今后开展烤烟根系分泌物研究提供了可靠保证。

2、本发明可同时检测5种酚酸，操作简单，检测速度快，重现性好，准确度高。

3、检测成本较低，所需高效液相色谱仪和旋转蒸发仪等仪器均为实验室常用检测设备，无需配置专门仪器即可完成。

4、操作方法简单易行，可由一人独立完成且对操作人员无特殊技术要求。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步地说明，但本发明的保护范围并不限于此。

实施例1

实施例中根系分泌物样品均系烤烟根系分泌物。

1、分别称取对羟基苯甲酸、香草酸、香豆酸、丁香酸、阿魏酸各0.1000g，用5mL甲醇溶解并用超纯水定容至1000mL，制成质量浓度为100μg/mL的酚酸混合储备液，将混合储备液分别稀释5倍、10倍、20倍、40倍和100倍作为标准工作液。

2、对各种酚酸标准工作液浓度与其相应峰面积进行回归，回归方程、线性范围及检出限见表1。

表1各种酚酸的回归分析和检出限