[发明专利]稳定的免疫调节寡核苷酸

说明书

本申请是申请日为2004年6月10日、中国申请号为200480023195.6、发明名称为“稳定的免疫调节寡核苷酸”的发明申请的分案申请。 

发明背景

有关申请

该申请要求2003年6月11日提交的美国临时申请No.60/477,608的权益，2003年8月29日提交的美国临时申请No.60/499,038的权益，2003年9月18日提交的美国临时申请No.60/504,279的权益，其整体并入作为参考。 

技术领域

本发明涉及分子生物学、免疫学和医学领域。更具体地，本发明涉及免疫刺激性寡核苷酸及其在治疗中的应用。 

背景技术

免疫系统已进化为特异性识别含有未甲基化的CpG二核苷酸基序的DNA，所述的基序在病原微生物如细菌和病毒的DNA中广泛存在。结果，含有未甲基化CpG的DNA成为脊椎动物免疫系统的有效刺激剂。通过DNA免疫刺激的第一个报道来自应用细菌DNA和含有回文序列的DNA小片段的研究，所述的DNA都是具有磷酸二酯骨架的双链结构。Tokunaga，T等(J.Natl.Cancer Inst.72：955-962(1984))报道了分离自牛分枝杆菌(Mycocacterium bovis)BCG的DNA有效的抗肿瘤活性。Kataoka，T等.，(Jpn.J.Cancer Res.83：244-247(1992))、Hartmann等.(European Journal of Immunology 33：1673-1641(2003))、Marshall等(Journal of Leukocyte Biology73：781-792(2003)显示了合成的脱氧寡核苷酸的相似类型的抗肿瘤活性，所述合成的脱氧寡核苷酸的设计基于牛分枝杆菌BCG cDNA序列。 

Sato，Y，等(Science 273：352-354(1996))显示了含有CpG的DNA在DNA疫苗应用中的重要性(也参见Gurunathan S.，等(Annu.Rev.Immunol.18：927-974(2000))。Pisetsky，D.S.，等(Mol.Biol.Rep.18：217-221(1993))和Krieg，A.M.，等.，(Nature 374：546-549(1995))显示，在特定序列的环境中含有未甲基化的CpG-二核苷酸的DNA(CpG DNA)激活脊椎动物的免疫系统，导致B细胞增殖，并且激活巨噬细胞、单核细胞、天然杀伤细胞(NK细胞)和树突细胞。出于对CpG DNA激活的应答，免疫细胞分泌大量的细胞因子，包括IL-12、IFN-γ、INF-α、IL-6和TNF-α，并且表达几个共刺激分子(例如，参见Pisetsky，D.S.，等和Krieg，A.M.，等，见前文) 

Kandimalla，E.R.，等(Curr.Opin.Mol.Ther.4122-129(2002))指出CpG-二核苷酸的存在和位置以及其侧翼的序列对于其免疫刺激活性是关键的。Agrawal，S.，等(Current Cancer Drug Targets 1：197-209(2001))公开了由于CpG寡核苷酸的侧翼序列中的核糖修饰而产生的重大影响。这些影响取决于取代基的位置和性质，包括2’-O-甲氧基乙氧基和2’-或3’-O-甲基。Yu，D.，等(Bioorg.Med.Chem.9：2803-2808(2001))证明了磷酸盐修饰因修饰位点不同也能增高或降低免疫刺激活性。Yu D.，等(Bioorg.Med.Chem.Lett.11：2263-2267(2001))和Yu D.，等(Bioorg.Med.Chem.11：459-464(2003))公开了通过缺失某些核苷酸碱基能增加活性。此外Yu D.，等(Bioorg.Med.Chem.11：459-464(2003))公开了通过用非核苷酸连接体取代某些侧翼核苷酸可增加免疫刺激活性。