[发明专利]一种天然抗氧化肽Macrotympanain-A1及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种天然抗氧化肽Macrotympanain-A1，其特征在于天然抗氧化肽Macrotympanain-A1，其为基因编码产物，N端到C端的序列：FLPGLECVW。

2.权利要求1所述的抗氧化活性的多肽的制备方法，其特征在于按以下步骤进行：

①皮肤分泌物的获取：用6V的电压刺激云南臭蛙的皮肤6s，之后以25mM Tris-HCl缓冲液pH＝7.8清洗臭蛙的身体，收集皮肤分泌物，将收集到的分泌物于4000rpm离心15min，将上清液真空冷冻干燥，并储存于-80℃备用；

②多肽的纯化：将冻干的上清液样品重新溶解，上预先用25mM Tris-HCl缓冲液pH＝7.8，含有0.1M NaCl平衡好的Sephadex G-75凝胶过滤柱，以0.3ml/min的流速进行洗脱，每10min收集一次洗脱液；洗脱液用280nm监测，绘制分离纯化图谱，收集到抗氧化活性成分，并用C₄柱除去里面的盐分后冷冻真空干燥后，用20mM的NaAc-HAc缓冲液pH＝4.0溶解样品，用相同缓冲液平衡好的Resource S分离柱进行纯化，利用含有1M NaCl的同一缓冲液、以1ml/min的流速进行洗脱，洗脱液用215nm波长进行监测，收集到具有抗氧化活性的成分后，用含0.1％v/vTFA的超纯水平衡好的HPLC C18分离柱进行分离，利用含有0.1％v/vTFA的乙腈以0.7ml/min的流速洗脱，洗脱液在215nm下进行监测，最终获取天然抗氧化肽Macrotympanain-A1纯品。

3.根据权利要求2所述的天然抗氧化肽Macrotympanain-A1的制备方法，其特征在于抗氧化活性评估具体如下：首先配置ABTS储存液：在水溶液溶解2.8mM过硫酸钾和7mM ABTS，避光反应至少6小时，之后，立即用水稀释125倍，50微升溶于水的样品加入50微升ABTS稀释液，避光反应至少10分钟，之后，在415nm波长下读其吸光度，样品抗氧化活性用如下公式进行计算：(A_blank-A_sample)×100/A_blank。

4.权利要求1所述的天然抗氧化肽Macrotympanain-A1的应用，其特征在于将抗氧化活性的多肽Macrotympanain-A1应用于化妆品的制备中，将天然抗氧化肽直接投入到化妆品的配方中。