[发明专利]一种猪瘟病毒S31基因的原核表达蛋白及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种猪瘟病毒S31基因的原核表达蛋白及其制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

猪瘟（Classical Swine Fever）是猪的一种高度接触性的致死性传染病。其病原体猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus）是黄病毒科瘟病毒属中的成员，为有囊膜的单股正链RNA病毒。S31蛋白是对病毒非结构蛋白进行加工的丝氨酸蛋白酶，在病毒蛋白加工成熟中具有重要作用。而现今对病毒S31蛋白的作用、抗原性等都没有进行深入研究。在现有的所建立的检测猪瘟抗体的间接ELISA 中，用于检测的抗原多为结构蛋白，如E0、E2蛋白，而S31蛋白作为抗原的检测方法还未有涉及。大肠杆菌表达系统是目前比较成熟的表达系统，具有操作简单，安全无毒，外源蛋白表达量高等优点，已经成功用于多种蛋白的生产。

发明内容

技术问题

本发明的目的是针对目前尚未有有关CSFV S31蛋白相关的基因工程制品的现状，提供一种准确可靠的CSFV S31蛋白的基因工程制品的制备方法，具体的说是一种鉴定猪瘟病毒抗体的S31基因序列原核表达蛋白抗原及其制备方法。

技术方案

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种重组大肠杆菌表达的猪瘟病毒S31蛋白，该蛋白系将S31基因片段克隆入原核表达载体pET32a得到重组表达载体，将该重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3) 获得重组大肠杆菌BL21(DE3)，将该重组大肠杆菌BL21(DE3)培养至OD600达0.6-0.8时加入终浓度为0.5mM的IPTG进行诱导表达，分离菌体蛋白经Ni亲和层析柱纯化获得。

所述S31氨基酸序列为SEQ ID NO.1，即猪瘟病毒多聚蛋白的第1591-1816位氨基酸残基。

PAVCKKVTEHEKCTTSMMDKLTAFFGVMPRGTTPRAPVRFPTSLLKIRRGLETGWAYTHQGGISSVDHVTCGKDLLVCDTMGRTRVVCQSNNKMTDESEYGVKTDSGCPEGARCYVFNPEAVDISGTKGAMVHLQKTGGEFTCVTASGTPAFFDLKNLKGWSGLPIFEASSGRVVGRVKVGKNEDSKPTKLMSGIQTVSKSTTDLTEMVKKITTMSRGEFRQITLA

其核苷酸序列为SEQ ID NO.2，即猪瘟病毒碱基序列的第5145-5822位碱基。

CCTGCCGTTTGCAAGAAGGTCACTGAACATGAGAAATGTACCACATCCATGATGGACAAATTGACTGCTTTTTTCGGTGTTATGCCGAGGGGCACCACACCTAGAGCCCCTGTGAGATTCCCTACCTCTCTCTTAAAGATAAGAAGGGGTTTGGAAACTGGCTGGGCGTACACACACCAAGGTGGCATCAGTTCAGTGGACCATGTCACTTGTGGAAAAGACTTACTGGTATGTGACACTATGGGCCGGACAAGGGTTGTTTGCCAGTCAAATAATAAGATGACAGATGAGTCCGAGTATGGAGTTAAAACTGATTCCGGATGCCCGGAAGGAGCTAGGTGTTATGTGTTCAACCCAGAGGCAGTTGACATATCAGGGACTAAAGGAGCCATGGTCCACTTACAAAAAACTGGAGGAGAATTCACCTGTGTGACAGCATCAGGAACTCCGGCTTTCTTTGATCTTAAAAACCTTAAAGGCTGGTCAGGGCTACCGATATTTGAGGCATCAAGTGGAAGGGTAGTCGGCAGGGTCAAGGTCGGTAAGAATGAGGACTCTAAACCAACCAAGCTTATGAGTGGAATACAAACAGTTTCCAAAAGTACCACAGACTTGACAGAAATGGTAAAGAAAATAACGACCATGAGCAGGGGAGAATTCAGACAAATAACCCTTGCT

所述的原核表达载体为pET32a。

本发明所述的重组大肠杆菌表达的猪瘟病毒S31蛋白的制备方法，包括如下步骤：